結核桿菌熱休克蛋白70在畢赤酵母中的分泌表達與鑒定.pdf

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1、!"卷#期生物工程學報’()*!"+(*#$%%#年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-.$%%#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!結核桿菌熱休克蛋白!"在畢赤酵母中的分泌表達與鑒定彭明利"凌寧許紅梅卿玉玲任紅（重慶醫(yī)科大學病毒性肝炎研究所，重慶0%%%!%）摘要為獲得結核桿菌熱休克蛋白5%在畢赤酵母中的分泌表達。構建了酵母表達質粒=ABC"D/"&35%，并將其線性化后用電穿孔法導入4#

2、0"#+3+&/(*#&EF!!&，經ACG方法篩選出陽性菌落，在%*&H甲醇誘導下分泌表達。所得產物經離心收集上清、超濾濃縮脫鹽、親和層析后，分別用FIF/AJE8、K3LM3N;O)(M和動物免疫實驗對上清中的重組PL=5%進行鑒定，并考察產物對IC的作用。經FIF/AJE8、K3LM3N;O)(M分析表明表達的PL=5%表觀分子量為5%QI并能特異性地與抗/,M*PL=5%單抗結合，動物實驗表明重組的PL=5%能在體誘導免疫應答。重組PL=5%能夠誘導IC成熟并釋放2?!型細胞因子。搖瓶發(fā)酵表達量達!$

3、%9

4、決定，熱其融合蛋白的獲得都是采用大腸桿菌胞內表達的方休克蛋白自身起著多肽伴侶功能。腫瘤組織PL=/式，這種方法存在表達量低、純化復雜等缺點。本研肽復合物因純化復雜和來源受限大大限制了它的應究嘗試將結核桿菌"&35%克隆到酵母表達載體用，現已證實在體外重組的PL=/肽復合物在沒有任=ABC"D中，應用畢赤酵母（4#0"#+3+&/(*#&）表達系統，何佐劑的情況下也能誘導針對所攜帶抗原肽特異性以胞外分泌的方式表達了PL=5%，并對表達的蛋白細胞毒2淋巴細胞（C.(M(7:@2S.9=?(@.M3，C2S）效質進

5、行了生化和免疫學鑒定，為進一步研究制備結應。其中應用最為廣泛的PL=是結核桿菌PL=5%和核桿菌PL=5%/抗原肽疫苗以及結核桿菌PL=5%與抗［!］哺乳動物<="4。,(N(:等設計了一系列對PL=5%原肽的融合蛋白疫苗提供物質基礎。有高度親和力的雜交肽在體外與其重組，免疫小鼠［$］#材料和方法后獲得特異性的免疫應答。8*G(9-;等應用J型流感病毒核心蛋白=+A（$%4U$$"）與結核桿菌#$#材料PL=5%在適當的緩沖溶液中重組為復合物，也能引4#0"#+3+&/(*#&EF!!&表達宿主菌及整合表達質

6、［#］起抗原特異性的C2S作用。FN:V-LM-V-等應用體外粒=ABC"和=ABC"D為B;V:MN(<3;公司產品。含結核重組<="4/’F’（泡狀口炎病毒）和PL=5%/’F’在動物桿菌熱休克蛋白基因（"&35%）的質粒=E82/"&35%由免疫實驗證實了這一觀點。本實驗室構建。W+X（YR(-9:;(-@:Z）和蛋白胨為此外，PL=5%還能誘導JACL成熟，尤其是IC細I:[@(公司產品，限制酶、20I+J連接酶購自G(@?3［0］胞。,-N:-等證實重組人PL=5%能夠誘導IC細胞公司，=[I+J

7、聚合酶為AN(93<-公司產品，鼠J;M:/的成熟并提高CI0%、CI1#、CI14、PSJ/IG分子在PL=5%抗體（,XS公司產品）和細胞因子BS/4、BS/!$、IC細胞上的表達。同時PL=5%和<="4能誘導JACL2+6/!（8;Z(<3;公司）購自深圳晶美，PGA標記羊抗細胞分泌細胞因子如BS/4、BS/!$、2+6/!，其中BS/!$鼠B

8、$&；6-7：14/$#/4#1$$4"4；8/9-:)：9:;<):=&&>.-?((*@(9*@;9期彭明利等：結核桿菌熱休克蛋白01在畢赤酵母中的分泌表達與鑒定:F0限公司，!"#$%&%’()*購自+,&-%公司，其它試劑均為液，用!"#$%&%’()*分離純化，參考文獻用含:3--(