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1、第25卷第2期鎮(zhèn)江高專學報Vo1．25No．22012年4月JournalofZhenjiangCollegeApr．，2012納豆菌特性的研究鮑艷霞，陳鈞(1．鎮(zhèn)江高等?？茖W校4~：r-系，江蘇鎮(zhèn)江212003；2．江蘇大學藥學院，江蘇鎮(zhèn)江212013)摘要：篩選具有強溶栓活性等多種生物學功能的納豆菌，并對其形態(tài)、生長特性等進行研究。分離出單茵落，進行菌種鑒定，并在不同條件下用測茵懸液吸光度的方法研究其生長特性。經(jīng)茵落形態(tài)、茵體形態(tài)以及生理生化特性鑒定確定為枯草桿茵。該菌種在種子培養(yǎng)基中生長的最適pH值為6．0～8．0，生長溫度為3O一45℃，耐鹽性較高，在含7％以下
2、NaC1的鹽溶液中均能生長。納豆茵的生長條件適宜于下一步產(chǎn)納豆激酶的研究。關鍵詞：納豆茵；茵種鑒定；生物學特性中圖分類號：$646文獻標志碼：A文章編號：1008．8148(2012)o2-oo51-03納豆芽孢桿菌是由日本學者澤村發(fā)現(xiàn)并分1．2主要實驗儀器和設備離¨出來的。經(jīng)過多年的研究，納豆菌的各種生理1)METTLERAE240分析天平。功能不斷被發(fā)現(xiàn)。2)SPF．250B生化培養(yǎng)箱。納豆菌屬于需氧菌中的非致病菌，能分泌淀粉3)THZ一82B氣浴恒溫振蕩。酶、蛋白酶、脂肪酶等多種酶類，具有分解蛋白質、碳4)LS—B50L立式壓力蒸汽滅菌器。水化合物、脂肪等大分子的
3、性能，使發(fā)酵產(chǎn)品中富含5)SW-CJ-2FD超凈工作臺。氨基酸、有機酸、寡聚糖等多種易被人體吸收的物6)uV．2102PCS型紫外可見分光光度計。質，而且納豆菌是以內生孢子的形式零星存在于動7)H66MC超聲清洗101．1型不銹鋼數(shù)顯電熱物腸道的微生物群落中，在不利的環(huán)境條件下能形鼓風干燥箱。成芽孢，將自己保護起來，能耐酸、堿、高溫，并在腸2實驗方法道上段迅速轉變成具有新陳代謝作用的營養(yǎng)型細胞，可以抑制腸內異常發(fā)酵和痢疾桿菌的繁殖，促進2．1菌種的自然分離與復壯乳酸菌等益生菌的增殖，調節(jié)腸內微生態(tài)平衡，保證原理是，牛奶中含有豐富的酪蛋白，而納豆菌的腸功能的正常j。因此，
4、研究納豆菌具有很重要的代謝產(chǎn)物具有分解酪蛋白的能力，在菌落周圍可形意義。成分解酪蛋白的透明圈，根據(jù)透明圈的大小和菌落的生長狀況，挑選強壯的菌株。1實驗材料用無菌水稀釋菌體，用10倍稀釋法稀釋至1．1材料、試劑10稀釋度，取10～，l0稀釋度菌液各0．1mL涂1)納豆菌，系在江蘇大學藥學院陳鈞教授從日布于復壯平板。在37℃培養(yǎng)24h后觀察平板透明本帶回的納豆中篩選得到的。圈情況，取透明圈直徑較大且菌落形狀正常者做菌2)脫脂奶粉、大豆購自市場。其他試劑為國產(chǎn)種鑒定，并轉接斜面培養(yǎng)基保藏。分析純。2．2茵落形態(tài)鑒定3)培養(yǎng)基有斜面與平板培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、鑒定菌落的形態(tài)、大小
5、、邊緣、表面、凸凹度、透復壯培養(yǎng)基、糖發(fā)酵培養(yǎng)基、檸檬酸鹽培養(yǎng)基等。明度等。收稿日期：2012一O1—06作者簡介：鮑艷霞(1968一)，女，江蘇泰州人，副教授，碩士，主要從事藥學研究；陳鈞(1947一)男，安徽當涂人，教授，博士生導師，主要從事天然藥物活性成分提取分離純化技術及工程研究。·51·2．3菌株培養(yǎng)特征央顏色深于邊緣部分(如圖1所示)，菌落直徑為根據(jù)《微生物學實驗》的要求，對分離的菌株2—5mm。進行革蘭氏染色等試驗。2．4生理生化特征微生物生化反應是指用化學反應來測定微生物的代謝產(chǎn)物。生化反應常用來鑒別一些在形態(tài)或其它方面不易區(qū)別的微生物。因此，微生物生化
6、反應是微生物分類鑒定的重要依據(jù)之一。依據(jù)《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》]，對菌株進行過氧化氫酶的測定、糖酵解試驗、IMVIC與硫化氫試驗、V—P試驗等。2．5環(huán)境因素對菌種的影響根據(jù)《微生物學教程》，對菌種進行溫度、pH圖1納豆茵的茵落形態(tài)值、鹽度等的耐受性試驗。2．5．1菌種對溫度耐受性實驗3．2菌體特征用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基在水浴上進行試管液體1)桿狀，長2．0m，寬0．7～0．8m。培養(yǎng)，分別對菌株在溫度為1O～70℃時的生長情況2)染色均勻，革蘭氏陽性。進行測試，結果見表1。3)具有鞭毛。2．5．2pH值耐受性試驗4)芽孢中生，橢圓形，不明顯膨脹，具有運用牛肉膏蛋白胨培
7、養(yǎng)基進行液體培養(yǎng)，分別對動性。菌株在pH值為3，4，5，6，11時的生長情況進行測3．3液體培養(yǎng)特征試，結果見表1。普通肉汁培養(yǎng)基37℃靜置培養(yǎng)24h，培養(yǎng)液較2．5．3鹽度耐受實驗清，液面上形成一層白色菌膜，沒有氣泡。用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行液體培養(yǎng)，調節(jié)培3．4生理生化特性養(yǎng)基中NaC1的含量，觀察鹽度為2％，5％，7％，對上述菌株進一步作生理生化試驗。結果列于10％時菌株的生長情況，結果見表1。表1中。2．6粘性拉絲的產(chǎn)生表1納豆菌的生長特性將大豆浸泡過夜，取出瀝干后，放入搪瓷盤中，性質(properties)納豆菌枯草芽孢桿菌高壓
