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《抗谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）單克隆抗體的研制及初步應用.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、●CT^HR／CUtlURAE華北農學報·2011，26(4)：82—85BOREILI—SIHICA抗谷胱甘肽·S一轉移酶(GST)單克隆抗體的研制及初步應用滕蔓，羅俊，王秋霞，王麗，張改平(河南省農業(yè)科學院，農業(yè)部動物免疫學重點開放實驗室，河南省動物免疫學重點實驗室，河南鄭州450002)摘要：以純化的谷胱甘肽轉移酶標簽蛋白(GST)免疫Balb／C小鼠，取免疫鼠脾細胞與NSO骨髓瘤細胞按常規(guī)方法融合，用純化的GST經間接ELISA篩選，陽性孑L經3次有限稀釋法亞克隆，最終獲得2株抗GST的單克隆雜交瘤細胞株，分別命名為
2、4B7一E4和4B7一F4。間接ELISA檢測4B7一E4、4B7一F4細胞培養(yǎng)上清的效價分別為1：4000、1：3000，腹水效價分別為1：3×10。和1：2×10。Western—blot結果表明，這兩株單抗均可以特異性地識別GST蛋白和帶有GST標簽的融合蛋白。關鍵詞：GST；單克隆抗體；間接ELISA中圖分類號：Q78文獻標識碼：A文章編號：1000—7091(2011)O4—0082—04PreparationofMonocionalAntibodiesagainstGlutathione-S·transferas
3、e(GST)TENGMan，LUOJun，WANGQiu—xia，WANGLi，ZHANGGai—ping(KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture，HenanProvincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology，HenanAcademyofAgricuhuralSciences，Zhengzhou450002，China)Abstract：Themonoclonalantibodies(McAbs)againstGlut
4、athione—S—transferase(GST)werepreparedinthepresentwork．Balb／CmicewereimmunizedwithpurifiedGSTandthecellfusionwasperformedbystandardmeth—od．Thehybridomsecretingantibodiesweresubclonedthreetimesbylimitingdilution．Twohybridomas，whichwerenamedas4B7一E4or4B7·F4andsecrete
5、dMcAbsagainstGST，werepickedoutbyindirectELISA．TheELISAantibodytitersofcellculturesupernatantandasciteof4B7一E4and4B7一F4were1：4000or1：3000．and1：3×10or1：2×10respectively．Western—blotshowedthatthese．McAbscanspecificallyreactwithGSTandre—combinantGST．Keywords：GST；McAb；I
6、ndirectELISA使用基因融合表達系統(tǒng)在大腸桿菌中可以生產蛋白酶如Thrombin、FactorX等切除，以期獲得表達大量可溶的、能正確折疊、有生物活性的蛋白質，因的外源蛋白。用GST融合表達系統(tǒng)表達外源基而這種方法越來越受到研究者們的歡迎，其中谷胱因時，對融合表達產物的檢測和純化非常重要，為甘肽s2轉移酶(GST)融合系統(tǒng)就是經常使用的一此，本試驗制備了抗GST的單克隆抗體，以期為種，已廣泛用于外源基因的融合表達?。pGEX表GST融合蛋白的檢測和純化提供物質基礎。達載體系統(tǒng)是將GST基因與目的基因相融合，其問l材料
7、和方法插入一蛋白酶切割位點，外源基因可插入pGEX質粒GST基因的3端酶切位點，表達載體在大腸桿菌1．1材料中表達的外源蛋白的N端含有GST片段，融合蛋白表達載體蛋白GST的載體菌pGEX一6p一1由河可用Glutathionesepharose4B以親和層析的方法純南省動物免疫學重點實驗室保存，IPTG和低分子量化，融合蛋白中的GST可選用有特異氨基酸位點的的Marker購自TaKaRa公司，8～l2周齡Balb／C小收稿日期：2010—05—21基金項目：國家公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項經費資助(200803015)作者簡
8、介：滕蔓(1977一)，女，河南周口人，助理研究員，主要從事動物疫病快速檢測技術及產品研發(fā)。通訊作者：張改平(1960一)，男，河南內黃人，研究員，博士，中國工程院院士，主要從事動物免疫學及重大疫病快速檢測技術研究。nCTI4期滕蔓等：抗谷胱甘肽．S-轉移酶(GST)單克隆抗體的研制及初步
