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《旋毛蟲谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達及鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、學校代碼10459學號或申請?zhí)?01212161842密級公開碩士學位論文旋毛蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達及鑒定作者姓名：李靈鴿導(dǎo)師姓名：崔晶教授學科門類：理學專業(yè)名稱：細胞生物學培養(yǎng)院系：生命科學學院完成時間：2015年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterMolecularCloning,ExpressionandCharacterizationofaglutathioneS-transferaseTsGSTGenefromTrichi
2、nellaspiralisByLinggeLiSupervisor:Prof.JingCuiCellBiologyDepartmentofBioengineeringApril,2015學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的此碩士學位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨兄進行科學研究所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容外，本論文不含有任何其他個人或集體己發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本論文的研究作出貢獻的個人和集體，均己在文中標明。聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者：曰肌7^1^-]°日學位論文使用授權(quán)聲明本學生在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成
3、的論文及相關(guān)的科研作品，知識產(chǎn)權(quán)都歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關(guān)保存和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保存或向國家有關(guān)部門和機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關(guān)的學術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學位論文作者-曰期：年月>曰本研究受國家自然科學基金項目（No.81271860and814719
4、81)資助。ThisworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina（No.81271860and81471981)摘要旋毛蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達及鑒定碩士研究生李靈鴿導(dǎo)師崔晶教授鄭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院寄生蟲學教研室（鄭州450052）河南省分子醫(yī)學重點學科開放實驗室（鄭州450052）摘要谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（Glutathione-S-transferase，GST）是一種具有解毒功能的酶，對各種有害的外源性化合物（如致癌物質(zhì)和誘變劑）與細胞內(nèi)
5、源性化合物（如脂質(zhì)過氧化合物）均有分解功能。GST在寄生蟲的抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用，它可以除去大部分的外源性和內(nèi)源性的親電子化合物，有助于寄生蟲在宿主內(nèi)的生存。GST蛋白酶在一些寄生蟲中已被鑒定并有所研究，如犬惡絲蟲、馬來絲蟲、日本血吸蟲、曼氏血吸蟲、肝片吸蟲及豬帶絳蟲等，但關(guān)于旋毛蟲GST的研究目前尚未見報道。本研究利用生物信息學分析了TsGST與其它寄生蟲及模式生物GST的進化關(guān)系，應(yīng)用分子克隆基因技術(shù)表達并純化了一種旋毛蟲谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶TsGST，獲得rTsGST蛋白及其免疫血清。通過SDS-PAGE和Wes
6、ternblot分析了該重組蛋白的抗原性及免疫原性，RT-PCR、Westernblot及免疫熒光試驗（IFA）鑒定了TsGST基因在旋毛蟲不同發(fā)育蟲期的轉(zhuǎn)錄、表達及其在蟲體的定位；觀察了rTsGST免疫小鼠后的抗體應(yīng)答類型及對宿主的免疫保護作用、免疫血清對旋毛蟲侵入腸上皮細胞（IEC）的影響及免疫血清介導(dǎo)的巨噬細胞對旋毛蟲的殺傷作用（ADCC）。運用生物化學方法分析了rTsGST的酶活性及其最佳反應(yīng)條件。本研究鑒定了rTsGST的性質(zhì)及其功能，為闡明旋毛蟲的侵入、生存及其與宿主小腸上皮細胞的相互作用和致病機制奠定基礎(chǔ)。
7、I摘要材料與方法1.旋毛蟲蟲種、實驗動物及細胞系旋毛蟲（Trichinellaspiralis）由鄭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院寄生蟲教研室昆明小鼠傳代保種。BALB/c小鼠、4-6周齡，購自河南省實驗動物中心。所用細胞系為小鼠腸上皮細胞（intestinalepithelialcells，IEC），是由本教研室分離培養(yǎng)。2.rTsGST的免疫學分析將rTsGST免疫BALB/c小鼠，獲得rTsGST免疫血清，應(yīng)用旋毛蟲感染小鼠血清及rTsGST通過ELISA及Westernblot鑒定rTsGST的抗原性。3.TsGST基因的轉(zhuǎn)錄
8、、表達及定位收集旋毛蟲的感染性幼蟲、成蟲、新生幼蟲及肌幼蟲，提取總RNA進行RT-PCR，擴增TsGST基因及內(nèi)參基因GAPDH，檢測TsGST基因的表達時相。收集小鼠感染旋毛蟲后3d與7d的成蟲，新生幼蟲及肌幼蟲，制備可溶性抗原進行Westernblot，用rTsGST免疫血清對不同蟲期的可溶性抗原進行識別，檢測T
