淺談基質(zhì)效應(yīng).ppt

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1、淺談基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生的原因和影響基質(zhì)效應(yīng)的確認(rèn)方法基質(zhì)效應(yīng)的消除淺談基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)的產(chǎn)生原因基質(zhì)效應(yīng)的產(chǎn)生原因所謂基質(zhì)，指標(biāo)本中除分析物以外的一切組成。以測定血中紅霉素的濃度為例，除了紅霉素之外的蛋白、磷脂及其他內(nèi)源性物質(zhì)皆為基質(zhì)。基質(zhì)效應(yīng)，按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）文件的定義為①?標(biāo)本中除分析物以外的其他成分對(duì)分析物測定值的影響；②?基質(zhì)對(duì)分析方法準(zhǔn)確測定分析物的能力的干擾。廣義說來，基質(zhì)效應(yīng)也應(yīng)包括已知的干擾物（如紅霉素測定中磷脂、血紅蛋白、抗壞血酸等都是干擾物），但目前只將基質(zhì)效應(yīng)限于生物材料中未知或未定性的物質(zhì)或因素（如粘度、pH等）的影響?；|(zhì)效應(yīng)

2、的產(chǎn)生原因主要針對(duì)使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析生物樣品中的化合物所產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行討論。而在生物樣品（以血漿為例）中，引起基質(zhì)效應(yīng)的主要是磷脂、膽固醇等內(nèi)源性物質(zhì)。他們隨同待測物從色譜柱上一起被洗脫出來，經(jīng)離子源氣化，進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行檢測分析。而就在液滴氣化、發(fā)生庫倫爆炸變成小液滴直至產(chǎn)生氣體離子的過程中，這些內(nèi)源性的物質(zhì)由于極性較大，會(huì)同待測物離子競相競爭液滴表面，從而導(dǎo)致待測物的離子化效率降低或增強(qiáng)，引起響應(yīng)降低或增高，這就產(chǎn)生所謂的基質(zhì)抑制或基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。根本原因是什么？基質(zhì)效應(yīng)會(huì)產(chǎn)生哪些不好的影響基質(zhì)效應(yīng)的產(chǎn)生原因標(biāo)準(zhǔn)曲線法柱后灌注法監(jiān)控法基質(zhì)效應(yīng)的確認(rèn)方法樣品配制方法：配制三

3、種不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線（每條標(biāo)準(zhǔn)曲線7個(gè)點(diǎn)，每一種配制方法五樣本）1、藥物+內(nèi)標(biāo)：用流動(dòng)相稀釋到一定濃度2、藥物+內(nèi)標(biāo)：用含有5種不同來源的空白生物樣品的流動(dòng)相稀釋3、正常配制的生物樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線法評(píng)價(jià)方法：通過比較3組標(biāo)準(zhǔn)曲線待測組分的絕對(duì)響應(yīng)值、待測組分與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)值比值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，可以確定基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量的影響。標(biāo)準(zhǔn)曲線法絕對(duì)響應(yīng)值比較第1組測定結(jié)果可評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)和檢測器的性能以及整個(gè)系統(tǒng)的重現(xiàn)性。第2組測定結(jié)果同第1組測定結(jié)果相比，若待測組分響應(yīng)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差明顯增加，表明存在基質(zhì)效應(yīng)的影響。第3組測定結(jié)果，若待測組分響應(yīng)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差明顯增加，表明存在基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率因血

4、漿來源不同而不同的共同影響。標(biāo)準(zhǔn)曲線法絕對(duì)響應(yīng)值比較如果將第1組、第2組和第3組測得的相應(yīng)的響應(yīng)值分別用A、B、C表示，可按下列公式分別計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)(ME)，提取回收率(RE)和方法效率(PE)：ME(％)=B／A×100…………(1)RE(％)=C／B×100…………(2)PE(％)=C／A×100=(ME×RE)／100…………(3)公式(1)計(jì)算得到的ME為絕對(duì)基質(zhì)效應(yīng)。相對(duì)基質(zhì)效應(yīng)通過對(duì)不同來源樣品間的B值進(jìn)行比較獲得。當(dāng)ME值等于或接近100時(shí)，表明不存在基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)ME值大于100時(shí)，表明存在離子增強(qiáng)作用；當(dāng)ME值小于100時(shí)，表明存在離子抑制作用。標(biāo)準(zhǔn)曲線法待測組分

5、與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)值比值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率StandardlineslopesasameasureofarelativematrixeffectingquantitativeHPLC–MSbioanalysisTheresultsofthesestudiesindicatedthatthevariabilityofstandardlineslopesindifferentlotsofabiofluid[precisionofstandardlineslopesexpressedascoefficientofvariation,CV(%)]mayserveasagoodindicatorofar

6、elativematrixeffectand,itissuggested,thisprecisionvalueshouldnotexceed3–4%forthemethodtobeconsideredreliableandfreefromtherelativematrixeffectliability.標(biāo)準(zhǔn)曲線法另外，有學(xué)者建議使用低、中、高三濃度的質(zhì)量控制樣品（QC）來評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)的大小；有人建議使用定量下限（LLOQ）水平的6個(gè)個(gè)體的基質(zhì)來評(píng)價(jià)。標(biāo)準(zhǔn)曲線法將空白生物樣品的提取液和空白溶劑分別進(jìn)樣進(jìn)行液質(zhì)分析，同時(shí)利用注射泵將含相同濃度待測物的標(biāo)準(zhǔn)溶液通過色譜柱與質(zhì)譜接口之間的三通注

7、入到色譜柱流出液中。如果同空白溶劑的萃取離子圖譜相比，空白提取液的萃取離子圖譜的響應(yīng)信號(hào)明顯減弱或增強(qiáng)，則表明存在基質(zhì)效應(yīng)的影響。柱后灌注法(Post-columninfusionmethod)柱后灌注法樣品配制：分別用液液萃?。ㄕ和?異丙醇）、固相萃取、沉淀蛋白（乙腈沉淀和高氯酸沉淀）1、正常配制空白樣品2、用水代替血漿配制樣品3、流動(dòng)相柱后灌注法液液萃取ESI固相萃取乙腈沉淀高氯酸沉淀液液萃取固相萃取乙腈沉淀高氯酸沉淀APCI由于基質(zhì)效應(yīng)