分離以尿素為氮源的微生物課件.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物細(xì)菌尿素NH3中性堿性酚紅顏色：黃色紅色(變色范圍pH6.4-8.2)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g尿素10ml選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物（1）將土壤中的固氮菌分離出來(lái)（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來(lái)舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物……2、要驗(yàn)證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的細(xì)菌確實(shí)具有選擇作用，你該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。思考：配制

2、培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g酵母粉：0.12gNaCl：0.25g瓊脂糖：0.5g對(duì)照組選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組3、請(qǐng)你提供一種方法，判斷分解尿素的細(xì)菌確實(shí)能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若指示劑變紅，說(shuō)明該種菌分解了尿素。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶)通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學(xué)反應(yīng))統(tǒng)計(jì)被檢測(cè)的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量三、

3、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無(wú)機(jī)鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法三、實(shí)驗(yàn)中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，菌落數(shù)在30-300計(jì)數(shù)。重復(fù)性原則對(duì)照原則（排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度）做一系列濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度（六）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的原則：過濾滅菌后

4、的尿素（二）制備細(xì)菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液配制菌懸液1個(gè)99ml無(wú)菌水2個(gè)4.5ml無(wú)菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤倒平板需要倒3個(gè)LB平板，9個(gè)尿素平板LB(對(duì)照)尿素10-310-410-5每個(gè)稀釋度1個(gè)LB對(duì)照平板3個(gè)尿素平板(平行重復(fù)組)接種取0.1ml菌懸液涂布分離高濃度→低濃度，換槍頭低濃度→高濃度，可不用換槍頭涂布分離37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-4、10-3,、10-2利用血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀

5、察5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A練習(xí)題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)和其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。阻止特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌

6、落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法還有直接計(jì)數(shù)。顯微鏡稀釋度細(xì)菌30-3003、在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。平均數(shù)4、用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中．得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是2l0、240和250，取平均值233D

7、5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A