分離以尿素為氮源的微生物及計(jì)數(shù)

《分離以尿素為氮源的微生物及計(jì)數(shù)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、微生物種類及其代謝同化作用：生物體從外界獲取營養(yǎng)物質(zhì)，轉(zhuǎn)化為自身組成物質(zhì)的過程。異化作用：生物體自身物質(zhì)分解，放出能量，排出廢物的過程。微生物種類及其代謝同化作用類型：自養(yǎng)型：直接利用環(huán)境中的無機(jī)物合成自身所需要的有機(jī)物。如進(jìn)行光合作用的綠色植物、藍(lán)細(xì)菌。硝化細(xì)菌——化能合成作用：利用化學(xué)反應(yīng)釋放的化學(xué)能，將無機(jī)物合成自身的有機(jī)物。異養(yǎng)型：直接利用環(huán)境中的有機(jī)物合成自身所需要的有機(jī)物。如各種動(dòng)物、大多數(shù)細(xì)菌等。微生物種類及其代謝異化作用類型：有氧呼吸型（需氧型）C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+能量無氧呼吸型（厭氧型）C6H12O6→2C2H5OH+

2、2CO2+能量C6H12O6→2C3H6O3+能量微生物種類及其代謝微生物包括哪些類型？構(gòu)成微生物的細(xì)胞類型有哪些？不同微生物代謝類型有哪些？同化作用+異化作用=代謝類型微生物種類及其代謝微生物的類型細(xì)胞類型代謝類型舉例細(xì)菌單細(xì)胞、原核細(xì)胞自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)厭氧型藍(lán)細(xì)菌、硝化細(xì)菌醋酸桿菌、大腸桿菌乳酸菌、大腸桿菌微生物種類及其代謝微生物的類型細(xì)胞類型代謝類型舉例真菌單細(xì)胞、真核細(xì)胞多細(xì)胞、真核細(xì)胞異養(yǎng)、兼性厭氧異養(yǎng)需氧型酵母菌霉菌（青霉、曲霉）微生物種類及其代謝微生物的類型細(xì)胞類型代謝類型舉例病毒無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞內(nèi)寄生流感病毒、HIV、噬菌體、植物病毒等微生物的代

3、謝類型是配制培養(yǎng)基及培養(yǎng)的基礎(chǔ)分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．使用專一的培養(yǎng)基（含有尿素）分離專一的細(xì)菌（有脲酶的細(xì)菌）2．使用指示劑顏色的變化檢知酶（脲酶）所催化的反應(yīng)3．說明測定細(xì)菌數(shù)量的原理與方法分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理（1）瓊脂和瓊脂糖瓊脂是一種未被純化的混合物，主要成分為瓊脂糖和瓊脂果膠，還含有少量的含氮化合物，及其它有機(jī)雜質(zhì)和不溶性雜質(zhì)。瓊脂作為微生物固體培養(yǎng)基不可缺少的組成成分，其優(yōu)點(diǎn)是：①其主要成分不能被微生物利用；②可使培養(yǎng)基固化；③不影響培養(yǎng)基中其他營養(yǎng)物質(zhì)被細(xì)菌吸收。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)是用瓊脂糖代替瓊脂

4、作為微生物培養(yǎng)基的固化劑，其目的是：盡可能使培養(yǎng)基中只含尿素一種含氮化合物，以防止瓊脂中的含氮化合物被以尿素為氮源的細(xì)菌利用，有利于對(duì)這類細(xì)菌的篩選。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)（2）酸堿指示劑（鑒定）尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解產(chǎn)生了NH3，溶液會(huì)呈堿性。本實(shí)驗(yàn)中，酚紅作為酸堿指示劑被添加到了培養(yǎng)基中，其變色范圍是pH6.4～8.2，在酸性情況下呈黃色，堿性情況下呈紅色，實(shí)驗(yàn)原理以尿素為氮源的微生物培養(yǎng)一段時(shí)間后，由于細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶向周圍擴(kuò)散，將培養(yǎng)基中尿素的分解，產(chǎn)生的NH3使培養(yǎng)基的pH由原來的中性變?yōu)閴A性，于是培養(yǎng)基中的酚紅由黃色變

5、成紅色，圓形紅色區(qū)域愈大，表明這種菌利用尿素的能力愈強(qiáng)。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)關(guān)鍵技術(shù)——“涂布分離法”涂布分離時(shí)，需要先將菌液稀釋，一般稀釋到10-5～10-7之間，然后取0.1mL的不同稀釋度的菌液，放在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，再用消毒后的玻璃刮刀把這些菌液涂布在培養(yǎng)基平面，在適當(dāng)?shù)南♂尪认拢膳囵B(yǎng)產(chǎn)生相互分開單個(gè)的菌落。通常每個(gè)培養(yǎng)皿中有20個(gè)以內(nèi)的單菌落為最合適。將每個(gè)菌落分別接種在斜面上擴(kuò)大培養(yǎng)后，再做功能性實(shí)驗(yàn)。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)基本操作步驟（1）制備空白平板：取2個(gè)三角瓶，分別裝入已滅菌的全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基和

6、尿素固體培養(yǎng)基，放在超凈工作臺(tái)上，冷卻至60℃左右時(shí)，在酒精燈旁把上述兩種培養(yǎng)基分別倒至2個(gè)培養(yǎng)皿中（做兩組，共4個(gè)空白平板），輕輕搖勻，平放至凝固。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)（2）制備細(xì)菌懸液：在無菌條件下，在將1g土樣加到裝有99mL無菌水的三角瓶中，振蕩10min，即成10-2土壤稀釋液，并依次制備出10-3～10-7稀釋液。例如，若想制備10-6的稀釋液，可取0.5mL10-5的稀釋液。取樣時(shí)，盡量只取懸液，倒入有4.5mL無菌水的有蓋試管中，搖勻，放在試管架上。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)（3）涂布法分離細(xì)菌：在無菌條件下，分別取0.1mL的稀釋度為10-

7、4和10-5的土壤稀釋液（細(xì)菌懸液），分別加到裝有全營養(yǎng)LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（空白平板）中；再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上，待刮刀上火焰熄滅后，在酒精燈火焰旁打開培養(yǎng)皿，將前面已加入的土壤稀釋液（細(xì)菌懸液）均勻涂布到整個(gè)平面上。分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)（4）將培養(yǎng)皿倒置擺放在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h，觀察菌落數(shù)。觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)：統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上菌落數(shù)分離以尿素為氮源的微生物并計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)比較1與稀釋度為10-5相比，培養(yǎng)基中的菌落數(shù)在稀釋度為10-4時(shí)2在相同的稀釋度的情況下，尿