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1、實驗一還原糖和總糖含量的測定（3,5-二硝基水楊酸比色法）一．目的1.掌握還原糖定量測定的基本原理；2.學習比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度計的使用方法。二．原理在堿性的條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)）,還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對標準曲線并計算，便可分別樣品中還原糖和總糖的含量。三．儀器.試劑和材料1.儀器：（1）25ml刻度試管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶
2、（4）100ml容量瓶3個（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒溫水?。?）沸水浴（8）電子天平（9）分光光度計2.試劑；（1）1mg/ml葡萄糖標準液（2）3,5-二硝基水楊酸試劑（3）碘碘化鉀溶液（4）酚酞指示劑（5）6ml/LHCI（6）6ml/LNaOH3.材料：食用面粉四．操作步驟1.制作葡萄糖標準曲線：取7支25ml刻度試管，編號，按如下操作。操作項目管號0123456葡萄糖標準液（ml）00.20.40.60.81.01.2蒸餾水（ml）21.81.61.41.210.83,5-二硝基
3、水楊酸（ml）1.51.51.51.51.51.51.5吸光度（A540）0.0000.0810.2170.3310.4670.5750.648將各管搖勻，在沸水中加熱5min，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25min，用試管塞塞住試管口，顛倒混勻。在540nm波長下，用0號試管調(diào)零，分別讀取1~6號管的吸光度。以吸光度為縱坐標，葡萄樣毫克數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。2.樣品中還原糖和總糖含量的測定（1）樣品中還原糖的提?。簻蚀_稱取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸餾水
4、調(diào)成糊狀，然后加50ml蒸餾水，攪勻，置于50℃恒溫水中保溫20min，使還原糖浸出。過濾，用20ml蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。（2）樣品中總糖的水解和提?。簻蚀_稱取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml6mol/LHCI及15ml蒸餾水，置于水浴中加熱水解30min。待三角瓶中水解液冷卻后，加入1滴酚酞指示劑。以6mol/LNaOH中和至微紅色，過濾，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙，將濾紙全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻。精確吸取10ml定容過的水解液，
5、移入另一100ml的容量瓶中，以水稀釋定容，混勻，作為總糖待測液。（3）顯色和比色，取4支25ml刻度試管，編號，按下表的量操作。操作項目還原糖測定管號總糖測定管號ⅠⅡ還原糖待測液（ml）1100總糖待測液（ml）0011蒸餾水（ml）00113,5-二硝基水楊酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.3010.421五、注意事項：標準曲線制作與樣品含糖量測定應同時進行，一起顯色和比色。六、結(jié)果處理（1）由管、吸光度平均值在葡萄糖標
6、準曲線查出相應的還原糖毫克數(shù)為：0.167mg由管Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖標準曲線查出相應的還原糖毫克數(shù)為：0.235mg（2）計算樣品中還原糖和總糖的百分含量如下：還原糖℅=0.557℅總糖℅=0.235℅七、問題討論1.面粉中主要含有何種糖？答：淀粉2.糖含量定量測定的方法還有哪些？答：①高效液相色譜法（HPLC）②苯酚-硫酸法③蒽酮法④雙折射現(xiàn)象幻想著親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認識
7、自己。21.7.277.27.202123:0323:03:13七月-2123:032、自知之明是最難得的知識。二〇二一年七月二十七日2021年7月27日星期二3、越是無能的人，越喜歡挑剔別人。23:037.27.202123:037.27.202123:0323:03:137.27.202123:037.27.20214、與肝膽人共事，無字句處讀書。7.27.20217.27.202123:0323:0323:03:1323:03:135、三軍可奪帥也。星期二,七月27,2021七月21星期二,七月27,2
8、0217/27/20216、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。11時3分11時3分27-七月-217.27.20217、人生就是學校。21.7.2721.7.2721.7.27。2021年7月27日星期二二〇二一年七月二十七日8、你讓愛生命嗎，那么不要浪費時間。23:0323:03:137.27.2021星期二,七月27,2021
