抗球蛋白實驗課件.ppt

《抗球蛋白實驗課件.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、抗球蛋白實驗主要內(nèi)容前言實驗原理實驗方法臨床應(yīng)用注意事項前言1908年，CarloMoreschi首先描述該試驗。1945年，Coombs、Mourant和Race建立了抗球蛋白試驗方法,故該試驗又稱為Coombs試驗。前言抗球蛋白試驗中球蛋白指IgG、C3片段、C4片段、IgM、IgA等，但主要指IgG和C3片段。IgG型抗體與紅細胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合后致敏，但不產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，屬不完全抗體。IgG具有很好的免疫原性，用其免疫動物（或通過雜交瘤技術(shù)）可獲得相應(yīng)抗體，即抗IgG（亦稱抗抗體）?？骨虻鞍自囼炘泶龣z紅細胞（表面可能包被有IgG或C3片段等球蛋

2、白）待檢血清（可能含有IgG等球蛋白）已知抗原的紅細胞待檢紅細胞（表面未知的抗原）已知抗體的血清產(chǎn)生可見凝集反應(yīng)為陽性，否則為陰性。抗球蛋白血清（廣譜和或單價）橋聯(lián)作用致敏分類直接抗球蛋白試驗：檢測紅細胞表面是否結(jié)合IgG、C3片段等免疫球蛋白。間接抗球蛋白試驗：檢測血清中是否含有IgG等免疫球蛋白。直接抗球蛋白試驗檢測紅細胞上抗體（不完全抗體）：試劑抗人球蛋白血清，分兩類：廣譜為抗IgG﹢抗C3抗體，單價分別為抗IgG抗體、抗C3抗體。不完全抗D血清（IgG型）。AB型血清。5%RhD陽性紅細胞懸液（3個人O型紅細胞洗滌后制備）。操作步驟1、取受檢查紅細胞

3、，以生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后，將上層鹽水倒盡，再以濾紙將管口附著的鹽水吸去，再配成5%紅細胞鹽水懸液(盡量除去血清，防止其含有的抗體產(chǎn)生干擾)。2、取上述5%受檢者紅細胞鹽水懸液1滴，移入試管（10mm×60mm）內(nèi)，加抗球蛋白血清1滴，混勻。操作步驟3、陽性對照：用不完全抗D血清致敏的5%RhD陽性紅細胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。4、陰性對照：正常人5%RhD陽性紅細胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。5、受檢者以及陽性、陰性對照管同時以1000rpm離心1min，輕輕搖動，觀察結(jié)果。間接抗球蛋白試驗檢測血清中抗紅細胞抗體（不完全抗體）：操作步

4、驟反應(yīng)物受檢管陽性對照陰性對照血清（已知或受檢）2滴--5%紅細胞懸液（受檢或已知）1滴--IgG抗D血清-2滴-AB型血清--2滴5%陽性紅細胞懸液-1滴1滴操作步驟1、取3支試管，按上表分別加入相應(yīng)的細胞、血清和試劑，混勻，置37℃水浴1h（致敏），用生理鹽水洗滌3次。末次洗滌后，將上清液除盡，并用濾紙將附著于管口的鹽水吸去（盡量除去血清，防止其含有的抗體產(chǎn)生干擾）。每管再各加生理鹽水1滴，混勻。2、每管各加適當濃度抗球蛋白血清1滴（橋聯(lián)），混勻，1000rpm離心1min，觀察結(jié)果。結(jié)果判讀陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管出現(xiàn)凝集者為陽性，不凝

5、集者為陰性。如陽性對照出現(xiàn)紅細胞不凝集或陰性出現(xiàn)紅細胞凝集結(jié)果，應(yīng)分析原因重做。注意事項離心過度，紅細胞不易散開，容易導致假陽性。紅細胞洗滌時應(yīng)迅速、連續(xù)，不應(yīng)中途停止。標本采集后最好立即進行試驗，延遲試驗或中途停止可使抗體從細胞上丟失（直抗）?？骨虻鞍籽鍑栏癜凑f明書使用，否則可產(chǎn)生前帶反應(yīng)和后帶反應(yīng)，而誤為陰性結(jié)果。注意事項紅細胞上吸附抗體過少或Coombs試驗陰性自身免疫性溶血性貧血直抗試驗可呈假陰性反應(yīng)。全凝集或冷凝集血標本及臍帶血標本含有Wharton膠，且洗滌不充分；血液標本中有很多網(wǎng)織紅細胞，且抗球蛋白血清中含有抗運鐵蛋白時，都可使紅細胞產(chǎn)生凝

6、集，出現(xiàn)假陽性。陰性結(jié)果應(yīng)核實：在試管中再加1滴IgG致敏紅細胞，若陽性則表示試管內(nèi)的抗球蛋白試劑確未被消耗，結(jié)果可靠?？骨虻鞍自囼炁R床應(yīng)用新生兒溶血?。℉DN）：胎兒紅細胞已被母親血型抗體（能通過胎盤的IgG型）致敏時。自身免疫性溶血性貧血（AIHA）：自身抗體吸附在自身紅細胞表面時。溶血性輸血反應(yīng)：輸入紅細胞被受者不完全抗體致敏時。藥物性溶貧：甲基多巴類藥物、青霉素等產(chǎn)生的不完全抗體吸附于紅細胞時。抗球蛋白試驗其他技術(shù)抗球蛋白試驗可以加入不同的介質(zhì)，其中包括低離子介質(zhì)、牛白蛋白、聚乙二醇、酶等，其目的可增加反應(yīng)的敏感性?？墒褂梦⒅夹g(shù)進行抗球蛋白試驗，試

7、驗結(jié)果判斷方便，且靈敏度高。