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1、中國動物傳染病學(xué)報(bào)2014，22(1)：16—24ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究論文·H3、H9亞型禽流感病毒雙重?zé)晒舛縋CR方法的建立及初步應(yīng)用申偉霞1,2田巧珍，陳圓，胡濤，閆麗萍2李國新，李雪松，滕巧泱，趙宇軍，李澤君(1．山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，太谷030801；2．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241)摘要：雖然H3、H9亞型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)是低致病性禽流感病毒，但其具有跨宿主感染哺乳動物的能力，對社會公共衛(wèi)生安全具有重大的潛在危害
2、，因而對這些亞型病毒的監(jiān)測極其重要。通過比對GenBank上H3、H9亞型禽流感病毒HA基因序列，設(shè)計(jì)了分別針對H3AIV和H9AIV的特異性探針。特異性試驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)的結(jié)果顯示，這兩個探針僅分別特異性識別H3、H9亞型AIV，且具有較好的擴(kuò)增效率。通過重組質(zhì)粒pMD19一T-H3HA和pMD19．T-H9HA10倍梯度稀釋液為模板，進(jìn)行敏感性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，本研究所建立的熒光定量PCR方法能檢測到100個DNA拷貝數(shù)H3AIV和10個DNA拷貝數(shù)的H9AIV，比傳統(tǒng)PCR方法敏感性分別提高了100倍和1000倍。此外，本方法還能檢測到10EID的H
3、3亞型AIV或H9亞型AIV，比傳統(tǒng)PCR方法檢測敏感性均提高了1000倍。批間和批內(nèi)試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于3％，表明本研究建立的方法具有較好的重復(fù)性。此外，與傳統(tǒng)PCR方法相比，用H3、H9亞型AIV雙重?zé)晒舛縋CR方法檢；NA-~感染動物的肺組織時，針對H3AIV的敏感性提高了10～100倍，針對H9AIV的敏感性提高了100倍。綜上所述，本研究所建立的H3、H9亞型禽流感病毒雙重?zé)晒舛縋CR方法具有較高的特異性和敏感性，對H3、H9亞型禽流感病毒監(jiān)測具有重要的應(yīng)用價值。關(guān)鍵詞：H3；H9；禽流感病毒；熒光定量PCR中圖分類號：$852．659．5
4、文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1674—6422(2014)01—0016—09DEVELoPMENTANDPRELIMINARYAPPLICATIoNoFFLUoRESCENTQUATI11ATIVEPCRASSAYFoRDETECTIoNoFH3ANDH9SUBTYPESoFAVIANINFLUENZAVIRUSSHENWei．xia’，TIANQiao—zhen，CHENYuan2HUTao，YANLi—ping。，LIGuo—xin，LIXue．song，TENGQiao．yang，ZHAOYu-jun，LIZe-jun2(1．Collegeofani
5、malscienceandtechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu030801．China：2．ShanghaiVeterinaryResearchInstitute，CAAS,Shanghai200241，China)Abstract：AlthoughH3andH9subtypesofAvianinfluenzavirus(AIV)arelowpathogenicinbirds，theyhaveadaptedabilitiestoinfectmammalians，whichposespotentialt
6、hreattohumanbeings．Therefore，surveillanceofH3andH9subtypesofAIVisimportantforpublic收稿日期：2013-l2-18基金項(xiàng)目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2011AA10A200)；國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31302115)；中央級公益性科研所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(2013JB06)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201003012)；上海市科委現(xiàn)代農(nóng)業(yè)領(lǐng)域重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(12391902000)作者簡介：申偉霞，女，碩士研究生，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專業(yè)通信作者：李澤君，
7、E—mail：lizejun@shvri．a(chǎn)c．cn；趙宇軍，E—mail：tgzhaoyujun@l63．com；滕巧泱，E—mail：tengqy@shvri．a(chǎn)c．cn第22卷第l期申偉霞等：H3、H9亞型禽流感病毒雙重?zé)晒舛縋CR方法的建立及初步應(yīng)用health．Inthepresentstudy,TaqManprimersspecificforeitherH3orH9subtypeweredesignedtodevelopfluorescentquantitativePCR(qPCR)bycomparingthehomologyofHAgen
8、esequencessubmiRedontheGenBank．Thespecif
