臨床免疫檢驗質(zhì)量保證ppt課件.ppt

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1、臨床免疫檢驗質(zhì)量保證衛(wèi)生部臨床檢驗中心李金明定義質(zhì)量保證(QualityAssurance,QA)為一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統(tǒng)的措施。室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作。定義室間質(zhì)量評價（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采取一定的辦法，

2、連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結(jié)果的可接受性。當EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒炇艺J證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力比對檢驗（Proficiencytesting,PT）。在以前的文獻中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。臨床實驗室常規(guī)檢驗步驟標本收集：選擇測定項目、標本收集和保存。實驗室測定：標本接收、貼標簽、樣本處理、核酸擴增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。報告和解釋：結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評之間的關(guān)系臨床免疫檢驗方法三大“標

3、記”免疫檢驗技術(shù):熒光標記、放射性核素標記和酶標其它標記免疫測定技術(shù)：發(fā)光物標記、金標、元素標記等免疫沉淀和免疫凝集試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）影響ELISA測定的因素試劑盒的因素實驗操作影響ELISA試劑盒質(zhì)量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:純化、合成和基因工程抗原抗體：多抗、單抗和基因工程抗體酶結(jié)合物：酶免疫測定的核心成份色原底物：OPD和TMB運輸貯存酶免疫測定操作中的注意事項標本的收集、運送和保存試劑準備加樣溫育洗板顯色比色結(jié)果判斷結(jié)果報告及解釋標本的收集最常用的標本：血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液。建議采用真空采血管及蝶形針具，以免直接接觸血液。標本采集時間、方

4、式、采集量、采集容器、預處理標本的保存用于抗體檢測的血清或血漿樣品應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2-8℃。試劑準備從冰箱中取出的試劑，待溫度與室溫平衡后使用；所用蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。加樣避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。溫育常采用的溫育溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。溫育所需時間與溫度成反比，即溫育溫度高，則所需時間相對較短。溫育時，微孔板應(yīng)置于水?。ǜ∮谒妫┗驖窈兄校允狗磻?yīng)溶液的溫度迅速與溫室平衡。洗板每次溫育后洗板是否徹底，與非特異背景顯色有很大關(guān)系。顯色加入底物A和B后，應(yīng)振蕩混勻當?shù)孜餅镺PD時，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行比色加酸終止顯色反

5、應(yīng)后，比色測定前應(yīng)振蕩混勻測定時，要注意酶標儀的波長是否已調(diào)至合適比較好的酶標儀可選擇單波長或雙波長比色測定，所謂雙波長比色，即在敏感波長（此時對所顯色具最大光吸收）如450nm和非敏感波長（所測得的光吸收為微孔板上的劃痕、污跡以及指紋等所致），最后從儀器得到的讀數(shù)為在敏感波長測得的吸光度與非敏感波長測得的吸光度之差。結(jié)果判斷按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結(jié)果ELISA測定的“灰區(qū)”（可疑結(jié)果的含義）定性酶免疫測定的CUT-OFF值臨床免疫檢驗中存在的問題臨床免疫檢驗的標準化問題臨床免疫檢驗的室內(nèi)質(zhì)控問題臨床免疫檢驗項目的濫用問題臨床免疫檢驗的標準化問題臨床免疫檢驗標準化的一般原則

6、（1）標準品和質(zhì)控品（2）參考方法標準品和質(zhì)控品（1）可提供標準品的國際標準化組織有：WHO生物學標準化專家委員會（ECBS）、英國國家生物學標準和質(zhì)控物研究所(NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC)、美國CDC和CAP、國家衛(wèi)生研究所（NIH）、IFCC等；國內(nèi)有中國藥品生物制品檢定所、衛(wèi)生部臨床檢驗中心標準品和質(zhì)控品（2）在美國免疫檢驗試劑方法用于臨床必須有FDA批準；在德國監(jiān)督機構(gòu)為INSTAND；在國內(nèi)試劑批準文號由SFDA負責。僅使用標準品并不能保證免疫測定結(jié)果的可比性，但其在保證免疫測定質(zhì)量中的重要性卻

7、是不可替代的。標準品和質(zhì)控品（3）標準品和質(zhì)控品的功能:可用作臨床檢測的校準物;可用來評價試驗的有效性;作為室內(nèi)質(zhì)控樣本;作為室間質(zhì)評樣本.標準品分級:可分為第一,第二和第三等三個等級.一級標準數(shù)量有限,可使用10-20年,是凍干品,內(nèi)含載體蛋白.一級標準可用來校準第二和第三級標準.國際標準品(IS)中作為第一級標準,二級標準可用來維持校準.標準品和質(zhì)控品（4）對適用于免疫測定的標準品的一般要求要求一級標準二級標準三級標準來源單一多