幾種三聚氰胺快速檢測(cè)方法比較

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1、幾種三聚氰胺快速檢測(cè)方法比較2007年3月,?美國(guó)發(fā)生多起因食用寵物食品而導(dǎo)致寵物中毒死亡事件。2008?年9月,?中國(guó)發(fā)生因食用三鹿嬰幼兒奶粉導(dǎo)致嬰幼兒產(chǎn)生腎結(jié)石病癥的嚴(yán)重事件。兩起事件的原因都是在食品或飼料中非法添加大劑量三聚氰胺。因此,?如何快速準(zhǔn)確的分析食品和飼料中的三聚氰胺成為食品企業(yè)、食品管理機(jī)構(gòu)和廣大消費(fèi)者密切關(guān)注的問(wèn)題。??為科學(xué)合理地篩選快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的三聚氰胺檢測(cè)方法，中國(guó)計(jì)量院提出搭建快速檢測(cè)方法測(cè)試平臺(tái)的建議，并承擔(dān)了科技部應(yīng)急支撐項(xiàng)目“三聚氰胺快速檢測(cè)技術(shù)測(cè)試平臺(tái)的

2、建設(shè)”?！　≡撈脚_(tái)啟動(dòng)以來(lái)，以權(quán)威檢測(cè)技術(shù)為支撐，以盲樣測(cè)試結(jié)果為依據(jù)，開(kāi)展技術(shù)評(píng)價(jià)，在國(guó)內(nèi)首創(chuàng)“統(tǒng)一現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試、統(tǒng)一評(píng)價(jià)方案、統(tǒng)一判別依據(jù)、統(tǒng)一專(zhuān)家評(píng)審、統(tǒng)一現(xiàn)場(chǎng)公布測(cè)試結(jié)果”的三聚氰胺檢測(cè)方法評(píng)價(jià)模式。以國(guó)際比對(duì)互認(rèn)為基礎(chǔ)，建立乳與乳制品中的三聚氰胺氣相色譜同位素稀釋質(zhì)譜法和液相色譜同位素稀釋質(zhì)譜法，為評(píng)價(jià)快速檢測(cè)方法奠定了重要的技術(shù)基礎(chǔ)。　　為確保三聚氰胺檢測(cè)結(jié)果的有效性，全面提高檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)原料乳及奶粉中三聚氰胺檢測(cè)能力水平，測(cè)試平臺(tái)先后組織實(shí)施了5輪全國(guó)三聚氰胺快速檢測(cè)技術(shù)方法的現(xiàn)場(chǎng)統(tǒng)一測(cè)試

3、評(píng)價(jià)活動(dòng)，共測(cè)試評(píng)價(jià)了56種檢測(cè)技術(shù)或方法，有效推出液相色譜法、拉曼光譜法、膠體金試免疫層析法（膠體金速測(cè)卡法）、酶聯(lián)免疫法(ELISA試劑盒法)?4種三聚氰胺快速檢測(cè)方法。??本文對(duì)常用的三種三聚氰胺快速檢測(cè)方法：液相色譜法、酶聯(lián)免疫法和膠體金免疫層析法的原理、特點(diǎn)做簡(jiǎn)單介紹并對(duì)其應(yīng)用進(jìn)行比較。1.?液相色譜法??????國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB?/T?22400?2008公布了原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)的高效液相色譜法（HPLC法）,?采用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑,?0.?2?um微孔濾

4、膜過(guò)濾后供HPLC?測(cè)定。采用的色譜柱為強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱,?流動(dòng)相為乙腈?緩沖液(?10?mmo?l/L?檸檬酸,?10?mmo?l/L辛烷磺酸鈉,?調(diào)節(jié)pH?至3.?0?),采用紫外/二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),?定量限為0.?3mg?/kg,?定量靈敏度提高,?且分析時(shí)間較短。HPLC法雖然應(yīng)用普遍,?但存在一定的局限性,?樣品前處理過(guò)程復(fù)雜,?儀器昂貴,對(duì)檢測(cè)人員的要求高，?檢測(cè)成本高。1.1?原理用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱分離，高效液相色譜-紫外檢測(cè)器/

5、二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。1.2?主要試劑和材料1.2.1?乙腈（CH3CN）：色譜純。1.2.2?磷酸（H3PO4）。1.2.3?磷酸二氫鉀（KH2PO4）。1.2.4?三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（C3H6N6）：純度大于或等于99%。1.2.5?三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：1.00×103?mg/L。1.3.?儀器1.3.1?液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器/二極管陣列檢測(cè)器。1.3.2?分析天平：感量0.0001?g?和0.01?g。1.3.3?pH?計(jì)：測(cè)量精度±0.021.4?檢驗(yàn)操作：按國(guó)標(biāo)GB?/T

6、?22400?2008要求操作。2.?酶聯(lián)免疫吸附法(?ELISA)????酶聯(lián)免疫法(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)是在免疫熒光和組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)。其主要是利用抗原與抗體的高特異性反應(yīng)，通過(guò)合適的載體，使酶標(biāo)抗原或抗體與待測(cè)樣品反應(yīng)，形成酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物，在相應(yīng)的酶底物參與下，復(fù)合物上的酶催化底物使之水解成有色物質(zhì)。一定條件下，呈色物質(zhì)與待測(cè)物的含量直接相關(guān)，因此可以根據(jù)呈色物質(zhì)顏色的深淺，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定性定量分析。近幾十年,?國(guó)

7、內(nèi)外已建立了數(shù)十種藥物殘留的ELISA?分析技術(shù),?檢測(cè)水平可達(dá)ng?甚至pg水平。一些發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)研制成商品化的檢測(cè)試劑盒用于快速檢測(cè)。近十多年來(lái)我國(guó)也研發(fā)出多種商品化的檢測(cè)試劑盒用于快速檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法具有特異性高、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單、成本低，并可同時(shí)對(duì)大批量樣品進(jìn)行快速檢測(cè)的特點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于食品中獸藥、毒素檢測(cè)的初篩中。08年中國(guó)出現(xiàn)“三聚氰胺奶粉事件”時(shí)，主要使用的進(jìn)口三聚氰胺速測(cè)試劑盒，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)也已研發(fā)出商品化的三聚氰胺速測(cè)試劑盒，試劑盒靈敏度0.01ppm,最低檢測(cè)限為

8、0.1ppm,已廣泛用于快速檢測(cè)。2.1?原理采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)抗三聚氰胺抗體，加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。2.2?主要試劑、材料?三聚氰胺ELISA檢測(cè)試劑盒2.3?儀器2.3.1?獸藥殘留分析儀或酶標(biāo)儀2.3.2?分析天平：感量0.01g2.4?檢驗(yàn)操作：按三聚氰胺ELISA檢測(cè)