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1、__________________________________________________小鼠部分組織的石蠟切片制作一、實(shí)驗(yàn)原理：利用脫水劑除去組織中的水分，再用透明劑二甲苯可以去除脫水劑酒精，而二甲苯可以溶解石蠟并將其導(dǎo)入到已脫水的組織細(xì)胞中，然后用熔化的石蠟對(duì)組織進(jìn)行包埋，冷卻后即可將柔軟的組織包埋在石蠟中，使其具有一定硬度，且不改變其大小和形狀。用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)可將其切為極薄的薄片，經(jīng)染色、脫水、裝片后在顯微鏡下可以清晰地觀察其組織結(jié)構(gòu)。二、材料與用具1．材料：小鼠肝臟、脾臟等。2．用具：溶蠟箱、蠟杯
2、、不同熔點(diǎn)的石蠟、酒精燈等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1．取材及固定取小鼠，采用拉頸處死或麻醉處死法將其殺死，取其脾臟和肝臟，切為邊長(zhǎng)約為0.5cm的組織塊。用先用0.85％的生理鹽水漂洗以洗去血液與污漬，如果是管狀組織則必須把管腔中污物洗凈，可用注射器自一端向管腔中注射生理鹽水?dāng)?shù)次，使其管腔沖洗干凈，切忌不可用刀或其他器具刮之。由動(dòng)物身上切取的組織必須是新鮮的，材料越新鮮越好，一般不應(yīng)超過死后24hr。如果是管狀器官或是其中有分泌之消化液，則死后應(yīng)迅速采取，以免組織自溶或上皮剝落。取下的材料馬上進(jìn)行固定，采用FAA固定
3、液，固定液的用量與組織塊體積之比一般在20:1，固定時(shí)間2hr以上，超過24hr時(shí)可繼續(xù)浸泡或轉(zhuǎn)入70%酒精中保存。不應(yīng)使組織塊貼于容器壁上，應(yīng)記錄固定液的名稱，材料的種類，動(dòng)物品種及開始固定的時(shí)間。2．沖洗固定后的組織塊在進(jìn)行脫水前用70%酒精洗去固定液。3．脫水和硬化經(jīng)過固定后的組織在水洗后要進(jìn)行脫水，脫水的目的將組織內(nèi)的水分用酒精或其他溶劑置換出來，使組織逐漸變硬，便于油類或其他透明及浸入，為熔化的石蠟浸滲到組織中創(chuàng)造條件。常用的脫水劑是不同濃度的酒精，因?yàn)榫凭c水有很大的親和力，酒精濃度可以逐漸升高，置換
4、出組織中的水。脫水必須充分，脫水不充分會(huì)影響透明和浸蠟。脫水過程要逐級(jí)上升，不能操之過急，跳級(jí)脫水會(huì)引起組織塊強(qiáng)烈的收縮變形。脫水所用的酒精濃度及過程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)組織塊在各級(jí)較低濃酒精（小于70％）中脫水的時(shí)間應(yīng)視組織塊的大小而定，大小不超過0.5立方厘米的組織塊脫水時(shí)間為6～12hr，在高濃度酒精中（大于70％）脫水時(shí)間為3hr左右。組織塊在無水酒精中需經(jīng)過兩次處理，以保證脫凈水分。由于無水酒精有使組織變脆的缺點(diǎn)，故在無水酒精
5、中脫水的時(shí)間不宜過長(zhǎng)，一般應(yīng)在15～30min左右。在脫水瓶中酒精的量與組織塊之比約為50:1。簡(jiǎn)化步驟如下：70%（一夜）——80%（1hr）——90%（30分）——95%（30分）——100%（15分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蠟+二甲苯（30分）——石蠟（80分）4．透明透明是石蠟切片法切片前必經(jīng)的一步。其目的在于用礦物油或植物油等透明劑置換出無水酒精，以便于熔化的石蠟浸滲到組織間隙中，故透明劑必須是能分別與石蠟和酒精相溶的。經(jīng)過透明劑處理的組織塊用肉眼對(duì)光觀察呈透明現(xiàn)象，所以這個(gè)過
6、程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、苯、甲苯等，這些都是穿透力強(qiáng)易使組織變脆的透明劑，因此透明的時(shí)間宜短，一般在20min即可。收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系管理員刪除__________________________________________________透明時(shí)組織塊由無水酒精中取出，先放入二甲苯和無水酒精等量混合的溶劑中1hr左右，然后取出放入純二甲苯中20min即可。5．浸滲浸滲過程是使包埋組織用的物質(zhì)深入到所有的組織間隙中，然后再通過各種方法使這種物質(zhì)凝固，而將組織材料包埋其中。石蠟切片法和火棉膠切片
7、法都需要浸滲過程。石蠟切片法是將加熱的石蠟滲到組織中而火棉膠切片法是使火棉膠滲到組織間隙中去。在浸滲前要先將選好的石蠟分別以容器裝好放在恒溫箱中，使其雜質(zhì)沉淀。石蠟最好選用軟蠟和硬蠟兩種，軟蠟熔點(diǎn)為45～50℃之間，硬蠟熔點(diǎn)為56～58℃之間，60～62℃的硬蠟很少用。冬天室溫較低時(shí)多用軟蠟，夏天室溫較高時(shí)多用硬蠟。浸滲應(yīng)在自動(dòng)恒溫箱中進(jìn)行。組織塊在各個(gè)蠟杯中浸蠟的時(shí)間如下：軟蠟1??????????30min軟蠟2??????????30min硬蠟1??????????30～60min硬蠟2??????????
8、60～120min這一時(shí)間不是固定不變的，應(yīng)視組織塊的種類及大小而相應(yīng)延長(zhǎng)或縮短浸蠟時(shí)間。浸蠟的總時(shí)間一般為：0.5立方厘米的組織塊時(shí)間為6～8hr；0.2～0.3立方厘米的組織塊時(shí)間為3～5hr；0.1～0.2立方厘米的組織塊時(shí)間為2～3hr。當(dāng)發(fā)現(xiàn)蠟杯中有灰塵或組織碎塊時(shí)應(yīng)使其沉淀或過濾后再使用。浸蠟不透包埋后會(huì)出現(xiàn)白色不透明部分，此時(shí)需要在浸蠟一次。6．包埋包埋就是
