藥敏試驗(yàn)PPT資料

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藥敏試驗(yàn)MIC：在與微生物生長(zhǎng)速率有關(guān)的特定時(shí)間間隔內(nèi)，通常是18－24小時(shí)，能夠抑制被測(cè)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。對(duì)倍稀釋的優(yōu)點(diǎn)：操作容易敏感株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群

1藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)的建立1.MIC的分布2.藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)定MIC的折點(diǎn)3.臨床療效和細(xì)菌清除率4.抑菌圈直徑的分布…………定抑菌圈折點(diǎn)統(tǒng)計(jì)學(xué)的線性回歸計(jì)算錯(cuò)誤率：盡可能減少極重要誤差(假敏感率)

2MIC的分布

3藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)：藥物吸收，分布，代謝，排泄藥效學(xué)：藥物對(duì)機(jī)體的作用時(shí)間依賴型（％T>MIC〕：β－內(nèi)酰胺類，大環(huán)內(nèi)酯類濃度依賴型（AUC/MIC比率〕：AGS,FQ這些參數(shù)可用于計(jì)算具有最佳藥效的給藥方案

4MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系耐藥中介敏感RISLog2.MICD1d2抑菌圈直徑（mm)v

5抑菌圈直徑與MIC的關(guān)系

6不同國(guó)家的判定折點(diǎn)－可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評(píng)價(jià)敏感時(shí)較保守更強(qiáng)調(diào)檢測(cè)出耐藥株（即特定的耐藥群）技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基

7敏感性分類(NCCLS的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血藥濃度超過細(xì)菌的MIC5倍以上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)MIC高于藥物在血、體液中可能達(dá)到的濃度

8敏感性分類（2）中介(Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應(yīng)率低于敏感株藥物生理濃集部位有效(尿－FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯(cuò)誤

9藥敏試驗(yàn)的方法學(xué)半定量…紙片擴(kuò)散法(抑菌圈直徑)MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動(dòng)化儀法抗生素連續(xù)梯度法(Etest)流式細(xì)胞儀

10藥敏試驗(yàn)方法的選擇紙片法有獨(dú)特之處選藥靈活、便宜、易懂MIC法：商品肉湯法(自動(dòng)化法)↑可用于厭氧菌、苛氧菌計(jì)算機(jī)管理快速，但可能有錯(cuò)誤（如誘導(dǎo)型菌）新藥的評(píng)價(jià)

11藥敏試驗(yàn)方法1（紙片擴(kuò)散法〕材料：浸有一定Abs的干燥的園濾紙片步驟：制備菌懸液－涂平板－貼紙片－孵育－卡尺測(cè)量抑菌圈直徑－判定R、I、S優(yōu)點(diǎn)：選藥靈活、便宜、一個(gè)平皿可測(cè)多個(gè)藥缺點(diǎn)：影響因素多適用于快生長(zhǎng)菌、部分苛養(yǎng)菌

12紙片擴(kuò)散法－影響因素MIC接種菌量細(xì)菌生長(zhǎng)率抗生素含量、擴(kuò)散性平皿厚度溫度，預(yù)孵育時(shí)間

13紙片擴(kuò)散法－標(biāo)準(zhǔn)化NCCLS：美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards)每年修訂更改包括質(zhì)控新藥的判定標(biāo)準(zhǔn)特殊耐藥性的檢測(cè)

14NCCLS的法規(guī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控規(guī)定常規(guī)測(cè)試報(bào)告的抗生素不同的藥判定標(biāo)準(zhǔn)不同不同的菌判定標(biāo)準(zhǔn)也不同

15常規(guī)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(1)腸桿菌科綠膿和非腸桿菌科一級(jí)氨芐頭孢他啶唑林，慶大慶大，替卡，哌拉二級(jí)阿米卡星阿米卡星氨芐/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲南頭孢膚肟，頭霉環(huán)丙，亞胺培南，替卡/克噻肟，曲松，環(huán)丙妥布，磺胺亞胺培南，替卡，哌拉三級(jí)氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松卡那，奈替，妥布氯霉素，奈替四環(huán)素，氯霉素

16常規(guī)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(2)葡萄球菌腸球菌一級(jí)苯唑，青霉素青霉素，氨芐二級(jí)紅霉素類萬古霉素克林，萬古三級(jí)氯霉素慶大

17常規(guī)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(3)流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌一級(jí)氨芐，青霉素青霉素，紅霉素TMP/SMZTMP/SMZ二級(jí)頭孢膚肟，噻肟氧氟，四環(huán)素他啶，氯霉素萬古霉素三級(jí)阿奇，頭孢克羅氯霉素，利福平環(huán)丙，亞胺培南利福平，四環(huán)素

18預(yù)報(bào)用藥(一)測(cè)試藥菌名推測(cè)其它藥物的敏感性苯唑西林葡萄球菌所有β－內(nèi)酰胺類四環(huán)素所有（除葡多西環(huán)素，米諾環(huán)素萄球菌和不動(dòng)桿菌〕紅霉素G＋球菌羅紅，克拉，阿奇克林霉素所有林可霉素

19預(yù)報(bào)用藥(二)測(cè)試藥菌名推測(cè)其它藥物的敏感性氨芐西林腸球菌青霉素青霉素G葡萄球菌氨芐，美洛，替卡頭孢噻吩腸桿菌科拉定，頭孢氨芐，克羅奈啶酸s腸桿菌科所有FQs萬古霉素s所有替考拉寧s

20紙片擴(kuò)散法操作規(guī)程(一)培養(yǎng)基：MH(重復(fù)性好，低抑制劑，營(yíng)養(yǎng)好)厚度：4mmPH：7.2~7.4pH低時(shí)，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯↓pH高時(shí)，青霉素類的活性↑離子濃度(Ca2+,Mg2+)影響氨基糖甙類、四環(huán)素對(duì)Pae活性高時(shí)，抑菌圈↓；

21紙片擴(kuò)散法操作規(guī)程(二)接種：純的新鮮菌落，0.5號(hào)麥?zhǔn)媳葷峁芫鷳乙涸?5分鐘內(nèi)種入平皿內(nèi)紙片中心的間距>=24mm孵育：CO2影響Ags,Tet,Macrolides質(zhì)控:ATCC25922,35218ATCC27853,ATCC25923

22紙片擴(kuò)散法結(jié)果的判定1.先看菌名（鑒定到種〕2.不同的藥物使用不同的折點(diǎn)藥名菌名RS菌株1菌株2Pip/Taz綠膿≤17≥1816R30SCAZ綠膿≤14≥1816I19S3.同是S時(shí)，偏離敏感折點(diǎn)越高的藥,MIC越低，活性也越高

23抑菌圈的分布

24抑菌圈的分布

25非NCCLS系統(tǒng)的擴(kuò)散試驗(yàn)方法國(guó)家學(xué)會(huì)培養(yǎng)基評(píng)論比較法UKBSACIso-Sensitest不校正MICsStokesUKBSACIso-Sensitest不校正MICsSFM法國(guó)SFMMH與NCCLS相近DIN德國(guó)DINMH與NCCLS相近SIR瑞典SMSPDM－ASMMIC相關(guān)值低Neo-sensitabs丹麥、比利時(shí)MH藥片，易保存雙歧澳大利亞Sensitest無中介

26藥敏試驗(yàn)的錯(cuò)誤來源(一)每個(gè)系統(tǒng)特有的局限性（快生長(zhǎng)菌〕培養(yǎng)基（成分、厚度、pH、離子濃度）各種材料的正確保存(紙片－20℃)操作步驟純菌、35℃、16－28h葡萄球菌、腸球菌24h

27藥敏試驗(yàn)的錯(cuò)誤來源(二)體內(nèi)、體外試驗(yàn)的不一致性某些菌測(cè)某些藥，結(jié)果有誤頭孢菌素、氨基糖甙類：沙門菌、志賀菌頭孢菌素：李斯特菌屬頭孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：腸球菌Beta－內(nèi)酰胺類：MRS即使敏感，也應(yīng)報(bào)告耐藥

28問題菌和耐藥機(jī)制有些菌無標(biāo)準(zhǔn)化的藥敏試驗(yàn)棒桿菌、芽胞桿菌、氣單胞菌、巴斯德菌某些耐藥機(jī)制需要多種檢測(cè)方法誘導(dǎo)型：VanB,BushI型酶MRS的異質(zhì)型表達(dá)ESBL藥敏可能無法檢出新出現(xiàn)的耐藥，VISA

29藥敏試驗(yàn)方法2－肉湯稀釋法48163264128256ug/ml混混清抗生素倍比稀釋，種菌105CFU/ml，孵育35℃，16-20h，判讀

30藥敏試驗(yàn)方法2－肉湯稀釋法調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯宏量肉湯法（2ml,13x100mm）微量肉湯法（0.1ml,微量板）自動(dòng)化儀優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確，可靠，可用于研究缺點(diǎn)：勞動(dòng)強(qiáng)度大細(xì)菌生長(zhǎng)情況不可查

31藥敏試驗(yàn)方法3－瓊脂稀釋法濃度163264128256ug/ml制備含對(duì)倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點(diǎn)種菌，104/每個(gè)點(diǎn)，孵育，判讀結(jié)果

32藥敏試驗(yàn)方法3－瓊脂稀釋法優(yōu)點(diǎn)：金標(biāo)準(zhǔn)精確可靠可同時(shí)測(cè)定多株菌（40株）細(xì)菌生長(zhǎng)情況可查缺點(diǎn)：測(cè)多個(gè)藥時(shí)勞動(dòng)強(qiáng)度大制備平皿費(fèi)時(shí)費(fèi)力

33藥敏試驗(yàn)方法4－Etest法細(xì)菌生長(zhǎng)區(qū)Etest塑料條橢圓形細(xì)菌生長(zhǎng)抑制區(qū)2561288016判讀抑菌濃度（MICug/ml)

34藥敏試驗(yàn)方法4－Etest法優(yōu)點(diǎn)連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關(guān)性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡(jiǎn)單，省時(shí)缺點(diǎn)：昂貴用途：快生長(zhǎng)菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌，分枝桿菌

35評(píng)價(jià)藥物體外抗菌活性的指標(biāo)MIC50,MIC90,MIC均值，MIC范圍，R，I，SMIC50/MIC90：MIC從小到排列，位于第50/90百分位菌株的MIC值單純比較MIC50，MIC90是片面的，還要同時(shí)看平均MIC及MIC范圍同時(shí)結(jié)合R，I，S，（不同藥物血濃度不同，安全范圍不同〕

36抗生素細(xì)菌人體RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDEEFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、細(xì)菌、人體

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38TimeaboveMICCorrelationofserumpharmacokineticswithMIC(susceptibility)ofanorganismTimeaboveMICTimeAntibioticconcentration(ug/ml)2DrugADrugBABDrugApresentatconcentrationof2ug/mlfor50%ofdosingintervalDrugBpresentatconcentrationof2ug/mlfor30%ofdosinginterval468039Slideno

39RelationshipbetweenTimeaboveMICandefficacyinanimalinfectionmodels020406080100020406080100TimeaboveMIC(%)PenicillinsCephalosporinsMortalityafter4daysoftherapy(%)Craig.DiagnMicrobiolInfectDis1996;25:213–217

40AntibioticconcentrationMICTimeAreaunderthecurveoverMIC24-hrAUC/MICiscorrelatedwithoutcomeofinfection,themagnituderequiredforsuccessandMICatwhichthisoccursbecomesthePDbreakpoint24-hrAUC/MICCorrelationofserumpharmacokineticswithMIC(susceptibility)ofanorganism41Slideno

41Therelationshipbetween‘timeaboveMIC90’andbacteriologicalcureinS.pneumoniae(red)andH.influenzae(blue)inotitismediaandsinusitisOtitismediaSinusitis‘TimeAboveMIC’(%ofdosinginterval)Bacteriologicalcure(%)020406080100020406080100Craig,ECCMID2000,Stockholm,Sweden42Slideno

42抗生素選擇時(shí)需考慮的因素藥物感染部位濃度對(duì)細(xì)菌MIC結(jié)果微生物學(xué)抗菌機(jī)制抗菌譜藥代動(dòng)力學(xué)吸收、分布、代謝、排泄給藥方案藥效學(xué)時(shí)間/濃度依賴型殺菌劑/抑菌劑組織滲透抗菌時(shí)效臨床效果細(xì)菌清除患者依從性耐受性耐藥產(chǎn)生

43抗生素治療失敗的主要原因病人相關(guān)原因依從性差不適當(dāng)給藥途徑免疫抑制病灶藥物原因給藥劑量與方式不當(dāng)藥效學(xué)考慮欠妥藥物失活微生物相關(guān)的原因病原確立錯(cuò)誤治療中出現(xiàn)耐藥抗菌活性不足接種效應(yīng)其他原因非感染（誤診）基礎(chǔ)疾病

44抗生素藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)關(guān)系研究PK/PD—藥代條件下的藥效PARAMETERS：PK：Cmax、AUC、T1/2PD：MICPK/PD：AUC/MICCmax/MICT>MIC

45抗生素藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)關(guān)系研究抗生素PK/PD分類抗生素分類PK/PD參數(shù)藥物時(shí)間依賴型（短PAE）T>MIC青霉素類、頭孢菌素類、氨曲南、碳青霉烯類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素、惡唑烷酮類、氟胞嘧啶時(shí)間依賴型（長(zhǎng)PAE）AUC24/MIC鏈陽霉素、四環(huán)素、萬古霉素、替考拉林、氟康唑、阿齊霉素濃度依賴型AUC24/MICorCmax/MIC氨基糖苷類、氟喹諾酮類、daptomycin、酮內(nèi)酯、甲硝唑、兩性霉素B

46抗生素藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)關(guān)系研究PK/PD研究的應(yīng)用—給藥方案的制定與優(yōu)化

47抗菌藥物合理應(yīng)用的藥理學(xué)考慮藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)參數(shù)與抗菌效力（動(dòng)物模型）參數(shù)藥物高于MIC時(shí)間青、頭孢、碳青烯、氨曲、大環(huán)、克林24hAUC/MIC氨基糖苷、氟喹酮、阿奇峰值/MIC四環(huán)、萬古、鏈陽氨基糖苷、氟喹酮

48第一大類：時(shí)間依賴殺菌作用（持續(xù)后效應(yīng)------無或輕、中度）?-LAbx（P、Cef、氨曲、碳烯類），克林和大環(huán)（紅、克）、四環(huán)在MIC4-5倍時(shí)殺菌率即處于飽合殺菌范圍主要依賴于接觸時(shí)間超過MIC時(shí)間是與臨床療效相關(guān)的主要參數(shù)

49氨基糖苷類屬于濃度依賴性抗生素體內(nèi)外研究證明Cmax/MIC為10左右為最佳治療參數(shù)對(duì)革蘭陽性、陰性菌均具有PAE（0.75~7.5hr）。第二大類:氨基糖苷類一日一次給藥

50低濃度易誘導(dǎo)適應(yīng)性耐藥高濃度不易選擇耐藥高劑量少次數(shù)給藥可避免耐藥氨基糖苷類一日一次給藥

51氨基糖苷類藥物每日一次給藥理論依據(jù)充分臨床療效不變或更好毒副反應(yīng)少更具經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值氨基糖苷類一日一次給藥