色譜峰拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因?qū)ｎ}培訓(xùn)課件

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色譜峰拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因

1一、色譜峰拖尾

2原因及解決方法1、溶解樣品的溶劑極性強于流動相；2、樣品量過載；3、固定相中的硅醇基與胺類相互作用；4、酸性化合物在硅膠上吸附；5、色譜柱床的空隙；6、色譜柱污染；7、色譜柱填料表面的惰性不夠好；8、色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；

31、由于溶解樣品的溶劑極性強于流動相而引起的拖尾。有幾種線索可以幫助確定是由于此種原因引起的拖尾。第一種就是先流出的峰的拖尾較后流出的峰拖尾嚴(yán)重；另一種跡象就是進樣量減少或者是樣品經(jīng)流動相稀釋后進樣峰拖尾減輕了。解決很簡單：將樣品溶解在流動相中，或者將樣品經(jīng)流動相稀釋至進樣后峰拖尾符合要求。

42、由樣品量過載引起的峰拖尾當(dāng)進樣量超過柱子的容量，樣品峰會呈現(xiàn)一個直角三角形。當(dāng)更多的樣品量注入時，峰的前端變得很尖而后端就拖尾更嚴(yán)重。解決方法：減少進樣量。

53、由固定相中的硅醇基與胺類相互作用引起的拖尾具有顯著的硅醇活性的固定相的色譜柱大部分都會發(fā)生此現(xiàn)象，而且中性pH（6～8）條件下比在酸性pH（<3）更易發(fā)生。解決方法：（1）確認流動相中有合適的緩沖鹽，盡量在pH<3的條件下操作（在pH<3的條件下操作，可使硅膠固定相上的硅醇基質(zhì)子化，減少了溶質(zhì)與硅醇反應(yīng)的幾率），使用足夠的緩沖液控制pH并減少離子交換效應(yīng)。（2）在流動相中加入競爭性的胺類三乙胺（TEA），TEA可以與硅醇發(fā)生強的反應(yīng)，并抑制樣品中的胺類與硅醇反應(yīng)。

64、酸性化合物在硅膠上吸附引起的拖尾解決方法：應(yīng)提高流動相中鹽的濃度來抑制二次反應(yīng)，降低流動相的pH使硅醇和溶質(zhì)質(zhì)子化，必要時可以向流動相中加入競爭性的酸。加入的酸優(yōu)先和硅膠固定相表面的酸性硅醇基反應(yīng)，抑制了酸性化合物和硅醇基的反應(yīng)，減低了拖尾。

75、由于柱床空隙引起的拖尾如果通常色譜柱具有良好的柱效，突然發(fā)現(xiàn)所有的峰均拖尾時，可能是柱子有空隙。先洗脫出的峰較后洗脫的峰更易受柱空隙的影響。雖然許多色譜分析者嘗試用相同的固定相材料修補柱子的空隙，但就經(jīng)驗來講，此法很少能達到預(yù)期的效果。由柱子空隙引起的拖尾最好的解決方法就是換掉它，這樣可以節(jié)省時間，金錢，減少麻煩。

86、色譜柱污染引起的拖尾如果色譜柱開始使用時峰形正常，使用一段時間后逐漸出現(xiàn)峰拖尾，則色譜柱被污染的可能性很大。解決方法：需要對色譜柱加強沖洗，即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。要做好樣品前處理，但如果前處理后依然比較臟，建議配置保護柱，一旦峰形變差，柱效下降，應(yīng)及時更換保護柱芯。

97、色譜柱填料表面的惰性不夠好引起的拖尾鍵合硅膠型填料表面的殘留硅羥基或金屬雜質(zhì)易與待測化合物發(fā)生二次作用而導(dǎo)致拖尾。解決方法：選用高純硅膠合成填料的色譜柱以及進行了有效硅羥基封端填料色譜柱。

108、色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷引起的拖尾解決方法：如色譜柱塌陷，則填充色譜柱；如篩板阻塞則反向沖洗色譜柱或更換篩板。

11二、色譜峰出現(xiàn)雙峰色譜雙峰指的是明明是同一種物質(zhì)，但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰，而表明含二種物質(zhì)。

12原因及解決方法1、色譜柱阻塞；2、溶劑極性及進樣量；3、樣品的特性及pH值；4、儀器參數(shù)；5、保護柱或分析柱污染。

131、色譜柱阻塞如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都是雙峰出現(xiàn)尤其采用單一純物質(zhì)時，可以肯定色譜柱出問題。色譜柱部分阻塞導(dǎo)致的峰裂分色譜圖如果是色譜柱阻塞，解決方法是將色譜柱反過來接，用流動相沖洗，將堵在色譜柱中的殘留物沖掉，再反過來，就可以了。

142、溶劑極性及進樣量樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動相溶解，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用溶劑極性強度大的試劑溶解樣品，而分析體系中以水為主，樣品進樣量大，此條件下完全可以肯定，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第一峰小且拖尾。將進樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是由于樣品的溶劑極性與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由于進樣量過大，色譜柱過載造成的。

153、樣品的特性及pH值有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，這種互變異構(gòu)體無法分開，而是以一個動態(tài)平衡存在。色譜分析時，在一個特定的條件下，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，一般雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾。當(dāng)pH稍一變化，雙峰現(xiàn)象將消失。

164、儀器參數(shù)如果記錄間隔時間太短，一個峰將變?yōu)槎€峰或更多，這時需要將間隔時間設(shè)置稍長。還有一種情況是，參比波長設(shè)置過小，本來一個峰會變成對稱的二個峰，這時要將參比波長設(shè)置更大，或者取消。

175、保護柱或分析柱污染取下保護柱再進行分析，必要時更換保護柱。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕胧蝗绻麊栴}仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

18謝謝