包菜中甲萘威含量的測定

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1、包菜中甲萘威的測定一、實驗目的1、了解甲萘威的作用與危害，以及測定甲萘威的方法2、熟悉熒光法測定甲萘威的步驟3、學會使用分光光度計二、實驗原理甲萘威，化學名為1-萘基-N-甲基氨基甲酸酯，是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑農藥。這類殺蟲劑的大量使用，造成了不同程度的污染，特別是與人們的生活息息相關的糧食、蔬菜等，因此對其殘留物的監(jiān)測顯得非常重要。對甲萘威等氨基甲酸酯類農藥的檢測方法主要有HPLC、GC—MS、TLC以及免疫檢測和生物傳感器等。目前國內常用的農藥殘留分析方法都存在樣品前處理過程繁瑣、消耗試劑、耗時長等缺點。本文根據甲萘威的熒光特性，用紫外

2、熒光法對甲萘威農藥進行檢測和定量分析，利用合適波長的紫外激發(fā)光照射甲萘威溶液，通過測量甲萘威吸收紫外光后發(fā)出熒光強度來檢測甲萘威濃度。 部分物質分子吸收了紫外和可見區(qū)電磁輻射后，它的電子能躍遷至激發(fā)態(tài)，然后以熱能的形式將這一部分能量釋放出來，本身又恢復到基態(tài)。當用一種波長的光(如紫外光)照射某種物質時，該物質會在極短的時間內，發(fā)射出較照射光波長為長的光(如可見光)，這種光就稱為熒光。對于熒光來說，當激發(fā)光停止照射后，發(fā)光過程幾乎立即(10-9～10-6s)停止。由于物質分子結構不同，所吸收光的波長和發(fā)射的熒光波長也有所不同。利用這個特性，可以

3、定性鑒別物質。同一種分子結構的物質，用同一波長的激發(fā)光照射，可發(fā)射相同波長的熒光。若該物質的濃度不同，則濃度大時，所發(fā)射的熒光強度亦強，利用這個性質可以進行定量測定。用熒光進行定性、定量分析的方法稱為熒光分析法，亦稱為熒光分光光度法。 根據郎伯比爾定律知，物質的熒光強度與被測物質的吸光程度和熒光效率有關．當溶液的濃度很稀時，熒光強度與濃度的關系式為：F=2．303φI0εcL≤0．05（φ-物質的熒光效率；I0-激發(fā)光強度；ε-摩爾吸收系數；c-樣品的濃度；L-樣品的光程差）對于一定的熒光反應，熒光效率φ一定，激發(fā)光強和溶液厚度(光程差)L一

4、定時，則有2．303φI0εL=K為常數，則有F=Kc，這說明物質濃度很稀時，熒光的強度與該溶液的濃度成正比。因此，只要測得物質的熒光強度，就可以算出物質的濃度，它是熒光定量分析的理論基礎。三、儀器與試劑儀器：RF-5301PC(島津)熒光分光光度計；石英比色皿；100ml容量瓶1個；25ml容量瓶5個；10ml吸管1支，表面皿1個；50ml燒杯2個；玻璃杯1根；漏斗1個；10ml量筒1個；濾紙1張；移液管（1ml、5ml）各1支試劑與試樣：甲萘威標準液（100μg/ml）；95%甲醇；包菜四、實驗步驟試樣中甲萘威含量的測定1）繪制激發(fā)光譜和

5、熒光光譜取3個25ml容量瓶，分別加入100μg/ml甲萘威標準溶液0.25ml、2.5ml,用95%甲醇稀釋至刻度，搖勻。從裝有0.25ml的標準液中吸取2.5ml于25ml容量瓶中稀釋至刻度，搖勻。分別測一下激發(fā)光譜和熒光光譜，找出最佳的激發(fā)光譜和熒光光譜（濃度為0.1μg/ml的標樣）。此儀器采用450W氙燈作為光源，選取的激發(fā)和發(fā)射狹縫為3nm，△λ=lnm。通過230nm～450nm波段進行掃描，確定最佳激發(fā)波長335nm左右，最佳熒光發(fā)射波長為278nm左右。2）繪制標準曲線大概測一下包菜試樣的熒光強度，配制一系列標準溶液，使試樣

6、的熒光強度落在標準溶液曲線中間（本實驗測的的試樣的熒光強度大約是0.30左右）移取2.5ml100100μg/ml甲萘威標準溶液于100ml容量瓶中，甲醇定容。從定容好的溶液中分別移取2.5ml，5.0ml，7.5ml，10.0ml，12.5ml溶液于5個25ml容量瓶瓶中，甲醇定容。固定λex=278nm，λem=335nm，激發(fā)和發(fā)射狹縫為3.0nm測定系列標準溶液的熒光強度3）包菜樣品的測量以含有甲萘威的包菜為樣品，將其切成碎片、放置充分攪拌均勻，稱取5g置與燒杯加入15ml甲醇溶液放置30min，提取并過濾，再用甲醇淋洗3次，放入25

7、ml的容量瓶定容，測定其熒光強度。1.依次打開儀器主機、計算機、打印機。2.雙擊電腦桌面上的菜單“RFPC國標”，跳出Initialization的界面，儀器開始自檢，在跳出的菜單欄上點擊“AcquireMode”并選擇“Spectrum”，由此點擊右下角的國標“Searchλ”，波長搜索的對話框出現，分別在“EXRange”和“EMRange”中輸入搜索范圍并點擊“Search”，開始搜索最佳激發(fā)波長與最佳發(fā)射波長。3.激發(fā)光譜與熒光光譜圖的繪制——搜索完畢，點擊“Configure”菜單中的“Parameters”，此時“Spectrum

8、Parameters”對話框出現。“SpectrumType”中選擇“Emission”。將激發(fā)波長固定在搜索出的最佳值，同時設置相應的發(fā)射波長范圍。設置完所有的參