熄風活絡(luò)膠囊微生物限度檢查方法驗證

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1、熄風活絡(luò)膠囊微生物限度檢查方法驗證1株洲市食品藥品檢驗所湖南株洲412008:2湖南中醫(yī)藥高等專科學校附屬第一醫(yī)院（湖南省直中醫(yī)醫(yī)院）湖南株洲412000【】目的：建立熄風活絡(luò)膠囊的微生物限度檢查方法。方法：按照《中國藥典》2010版一部附錄微生物限度檢查法驗證的要求對熄風活絡(luò)膠囊微生物限度檢查進行了方法建立和驗證研究。供試液制備采用稀釋法，制成1:10供試液。釆用培養(yǎng)基稀釋法（1:10供試液，每皿ImL）進行細菌計數(shù)檢驗，稀釋法（1:10供試液，每皿ImL）進行霉菌及酵母菌計數(shù)檢驗，采用常規(guī)法進行控制菌

2、檢查。結(jié)果：5種驗證菌株的回收率均高于70%;控制菌檢查經(jīng)方法驗證，可按常規(guī)法進行大腸埃希菌，大腸菌群及沙門菌檢查。結(jié)論：建立的方法準確、可靠、重現(xiàn)性好，適用于熄風活絡(luò)膠囊的微生物限度檢查。【關(guān)鍵詞】熄風活絡(luò)膠囊；微生物限度；方法驗證熄風活絡(luò)膠囊是由當歸、桃仁、白芷、酒大黃等20味中藥組成的醫(yī)院自制制劑，功能熄風豁痰，活血通絡(luò)，主治中風病早、中期。按《中國藥典2010年版一部》［1］要求，需做細菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)、控制菌檢查，同時需對檢驗方法進行驗證，以確保檢驗方法的準確可靠。1試驗材料1.1儀器凈化工

3、作臺、全自動立式壓力蒸汽消毒器、恒溫水浴鍋、TP-320A電子天平（感量O.Olg）、恒溫培養(yǎng)箱（30?35°C）、生化培養(yǎng)箱（25?28°C）、錐形瓶（100?150mL）、平皿（90mm）、量筒（100ml）、試管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度O.OlmL,10mL分度0.1mL）均于180°C干熱滅菌2h或高壓蒸汽121°C滅菌30min,烘干備用。1.2試驗樣品熄風活絡(luò)膠囊湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校附屬第一醫(yī)院批號:140922、140825、141213。1.3實驗方法按《中

4、國藥典2010年版一部》常規(guī)法，釆用ImL供試液加一個平皿，注入15?20mL培養(yǎng)基作菌落計數(shù)。1.4實驗菌株金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003、大腸埃希菌CMCC（B）44102、枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501、白色念珠菌CMCC（F）98001,乙型副傷寒沙門菌CMCC（B）50094、黑曲霉CMCC（F）98003等，均購自中國醫(yī)學細菌保藏中心。1.5培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號：140225）、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號：141203）、改良馬丁培養(yǎng)基（批號：140527）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)

5、基（批號：140208）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號：140614）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號：1411151）（均由北京路橋技術(shù)有限公司生產(chǎn)）；MUG培養(yǎng)基（批號：201404233）（由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司生產(chǎn)）1.6試劑及稀釋劑PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液（批號：140216，由北京路橋技術(shù)冇限公司生產(chǎn)），0.9%火菌氯化鈉溶液、錠基質(zhì)試液。2細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證[2][3]驗證試驗進行三次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的冋收率。2.1方法2.1.1菌液制備接種金黃色葡

6、萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯中，在30?35°C培養(yǎng)18?24小吋；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，在25°C培養(yǎng)24?48小時。上述培養(yǎng)物均用0.9%火菌氯化鈉溶液制成每ImL含菌數(shù)為50?1OOCFU的菌懸液，備用。2.1.2供試液制備分別取供試品各10g，加PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液至lOOmL，制成1:10的均勻供試液，備用。2.1.3試驗組細菌計數(shù)采用常規(guī)法。取1:10的供試液ImL，置平皿中，每個平皿加試驗菌液ImL.加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15?2

7、0mL,平行制備2個平皿，放冷，倒置平板，在30?35°C溫度培養(yǎng)48小吋，觀察結(jié)果。按《中國藥典2010年版一部》微生物限度菌落計數(shù)方法測定菌數(shù)。霉菌和酵母菌計數(shù)采用常規(guī)法，取1:10的供試液ImL.置平皿中，每個平皿加試驗菌液lmL,加入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基15?20mL,平行制備2個平皿，放冷，倒置平板，在25°C溫度培養(yǎng)72小吋，觀察結(jié)果。按《中國藥典2010年版一部》微生物限度菌落計數(shù)方法測定菌數(shù)。2.1.4菌液組分別取50?100CFU/mL的試驗菌液ImL注入平皿中，立即傾注培養(yǎng)基，平行制備2

8、個平皿，置適宜溫度培養(yǎng)48?72小時，觀察結(jié)果，按《中國約典2010年版一部》微生物限度菌落計數(shù)方法測定菌數(shù)。2.1.5供試品對照組按《中國藥典2010年版一部》微生物限度菌落計數(shù)方法測定本品的本底數(shù)。采用常規(guī)法檢查細菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)。2.1.6稀釋劑對照組取pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液ImL代替供試液，余下同試驗組。2.2菌冋收率試驗驗證試驗進行三次獨立的平行試驗，并分別計算各次試驗的菌冋收率。2.3結(jié)果判斷試驗組