諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法驗(yàn)證

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1、諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法驗(yàn)證摘要：目的建立諾氟沙星膠囊微生物限度檢查的方法,確保檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。方法聯(lián)合采用薄膜過(guò)濾和在培養(yǎng)基加入MnS04的方法，驗(yàn)證諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法。結(jié)果采用聯(lián)合方法，可去除諾氟沙星膠囊的殺菌活性，檢岀樣品的污染菌。結(jié)論此方法可用作諾氟沙星膠囊微生物限度的檢查。關(guān)鍵詞：諾氟沙星膠囊；薄膜過(guò)濾法：硫酸猛中圖分類(lèi)號(hào)：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-979X(2010)11-0437-02諾氟沙星是氟哇諾酮類(lèi)抗菌藥，具有廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭陰性菌的抑菌活性高。所以

2、，在諾氟沙星膠囊的微生物限度檢查中，為了徹底去除其殺菌活性，保證藥品檢驗(yàn)的準(zhǔn)確可靠，提高工作效率，我們采用薄膜過(guò)濾聯(lián)合培養(yǎng)基加入硫酸猛（MnS04）的方法，驗(yàn)證了諾氟沙星膠囊微生物限度的檢查方法。1儀器與材料1.1儀器XMTB型水?。ū本╅L(zhǎng)風(fēng)）;LD4-2A型臺(tái)式離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；HTY-2000A型智能集菌儀（杭州泰林）;FC50型一次性薄膜過(guò)濾器（杭州泰林）GMP-9160E隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海新諾）。1.2供試品諾氟沙星膠囊系石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)公司、哈藥集團(tuán)制藥總廠、雅來(lái)（佛山）制藥公司和河南

3、天方藥業(yè)公司生產(chǎn)。1.3培養(yǎng)基和試劑營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，膽鹽乳糖增菌液（北京三藥）。0.1mol/LMnSo4+,pH7.0氯化鈉一蛋白月東緩沖液,0.1%蛋白月東水溶液（中國(guó)藥品生物制品檢定所）?？莶菅柯N桿菌[cMCC（B）63501],金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，大腸埃希菌[CMCC(B)44102],白色念珠菌[CMCC(B)98001],黑曲霉[CMCC(B)98003](中國(guó)藥品生物制品檢定所）。2方法液制備按中國(guó)藥典2005年版二部附錄XIII微生物限度檢查法制備菌

4、液，濃度50-100cfu/mL,各種菌的計(jì)數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1O2.2供試液制備取供試品10g,加pH7.0無(wú)化鈉，蛋白月東緩沖液至100mL,置于459水浴溶解，作為伯0供試液；取伯0供試液，500r/min離心5min,取上清備用。2.3常規(guī)法的方法驗(yàn)證取伯0供試液1mL和大腸埃希菌液1mL注入平皿(1mL/nn),立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)平皿：枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉、白色念珠菌亦依上法操作。置入369培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24ho結(jié)果見(jiàn)表2。2.4薄膜過(guò)濾法的方法驗(yàn)證取供試品上清1mL

5、力口0.1%無(wú)菌蛋白月東水溶液至100mL,全量通過(guò)一次性薄膜過(guò)濾器，用pH7.0氯化鈉一蛋白月東緩沖液沖洗濾膜2次(100mL/次),最后一次沖洗液加入大腸埃希菌液1mLo將濾膜貼至含5mLMnSo4和20mL營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板，369培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h,觀察結(jié)果；枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌亦依上法操作，結(jié)果見(jiàn)表3O2.5控制茵的方法驗(yàn)證取供試品上清10mL加0.1%無(wú)菌蛋白籐水溶液至100mL,全量通過(guò)一次性薄膜過(guò)濾器，用pH7.0氯化鈉，蛋白月東緩沖液沖洗濾膜2次(100mL/次),將濾膜和大腸

6、埃希菌液1mL加入5mLMnS04和100mL膽鹽乳糖增菌液(1:20),369培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h,結(jié)果見(jiàn)表4。3結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表1~4。4討論4.1由表2可見(jiàn)，諾氟沙星膠囊用常規(guī)法檢驗(yàn)時(shí)，對(duì)白色念珠菌、黑曲霉的陽(yáng)性菌加入回收率均達(dá)到100%,無(wú)抑甘作用；對(duì)其他3種細(xì)菌有很強(qiáng)的抑菌作用。m2Ei￡3Ei￡34.2由表3、表4可見(jiàn)，諾氟沙星膠囊采用薄膜過(guò)濾法（MnSO4加到培養(yǎng)基中）,在水溫459,沖洗量300mL時(shí)，對(duì)大腸埃希菌、枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌的回收率均＞95%;控制菌檢查陽(yáng)性，無(wú)抑菌作用。4.

7、3采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，控制水溫在45乜，可增加供試品的溶解度。4.4建議生產(chǎn)培養(yǎng)基時(shí)，針對(duì)不同的抗生素，將中和劑混合至干燥培養(yǎng)基中，效果會(huì)更理想。參考文獻(xiàn)⑴國(guó)家藥典委員會(huì)，中國(guó)藥典2005年版二部［M］，北京：化學(xué)工業(yè)岀版社，2005,附錄93.