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《諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法學(xué)驗證探析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法學(xué)驗證探析【摘要】通過試驗，確認(rèn)所采用方法適用于諾氟沙星膠囊微生物限度檢查。方法：按品種項下微生物限度檢查規(guī)定對每一試驗菌逐一進(jìn)行驗證。結(jié)果：諾氟沙星膠囊的微生物限度檢查過程需要消除其抑菌性。結(jié)論：采用低速離心和薄膜過濾（加入硫酸猛溶液中和）的方法用于諾氟沙星膠囊的微生物限度檢查?！娟P(guān)鍵詞】諾氟沙星膠囊微生物限度檢查Abstract:Thepaperismainlyaboutthestudyofthevalida.tionofobviouscapsulemicrobiallimitinspectionmethodology
2、.1.驗證材料：1.1供試品：諾氟沙星膠囊（0.25g）（批號為:A201009220A201009221A201009222）o1.2培養(yǎng)基及試液：營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、營養(yǎng)肉湯、乳糖膽鹽培養(yǎng)基、改良馬丁、四硫磺酸鈉、膽鹽硫乳瓊脂、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂、pH7.0氯化鈉-蛋白腺緩沖液、硫酸牢孟溶液（0.lmol/L,分析純）。1.3菌種：枯草芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉1.4儀器：電熱恒溫水浴鍋、電動離心沉淀機(jī)。2.驗證步驟：1菌液的制備：2.1.1接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽砲桿菌、的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，
3、于30?351培養(yǎng)18?24小時，分別取各菌種培養(yǎng)液lml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋，金黃色葡萄球菌稀釋至10-5,大腸埃希菌稀釋至10-7,枯草芽鞄桿菌稀釋至10-5,約為50?100cfu/ml,備用。2.1.2接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于23?28°C培養(yǎng)24?48小時，取培養(yǎng)液lml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋至10-6,約為50?100cfu/ml,備用。2.1.3取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物用5ml0.9%無菌氯化鈉溶液適量與標(biāo)準(zhǔn)比濁管進(jìn)行比較，取比濁后的菌懸液lml加入9ml0.9
4、%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋至10-4,約為50?100cfu/ml,備用。2.2供試液制備：取供試品10g,加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白豚緩沖液至100ml,水?。?51）保溫振搖，分散混勻，作為1：10的供試液。2.3細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)驗證試驗2.3.1試驗組：(1)取規(guī)定量的供試液，置無菌條件離心(500轉(zhuǎn)/分)3分鐘，取上清液置無菌試管中，用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白豚緩沖液補(bǔ)至原量，混勻后取1ml加至100mlPH7.0無菌氯化鈉-蛋白豚緩沖液中，并向其中加入0.lmol/L的硫酸猛溶液10ml,混勻，然后按照中國藥典2010版附
5、錄微生物限度檢查法中的薄膜過濾法進(jìn)行過濾，單膜沖洗量1000ml,并在最后100ml沖洗液中加入相應(yīng)試驗菌液lml,沖洗后取出濾膜，菌面朝上，貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，置規(guī)定條件下培養(yǎng)，每株試驗菌平行制備二個平皿。(1)霉菌、酵母菌計數(shù)：采用培養(yǎng)基稀釋法。取1：10的供試液0.2nd加至平皿中，并加入試驗菌液Ind,立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(溫度低于45°C),置規(guī)定條件下培養(yǎng)，每株試驗菌平行制備二個平皿。2.3.2菌液組：取稀釋好的各菌液lml,分別加入平皿中，加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置規(guī)定條件培養(yǎng)，測定所加的試驗菌數(shù)。每株試驗菌制
6、備二個平皿。2.3.3供試品對照組：取規(guī)定量的供試品，方法同試驗組，加入相應(yīng)的培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿。2.3.4稀釋劑對照組：取稀釋劑lml替代供試液，方法同試驗組，每株試驗菌平行制備2個平皿。2.3.5試驗組回收率(%)二■X100%稀釋劑對照組菌回收率(%)二■X100%2.3.6培養(yǎng)：細(xì)菌計數(shù)平板30-35°C培養(yǎng)3天；霉菌、酵母菌計數(shù)平板23-28°C培養(yǎng)5天，逐日點計菌數(shù)。2.3.7判斷標(biāo)準(zhǔn)：稀釋劑對照組及試驗組的菌回收率應(yīng)均不低于70%o三次試驗結(jié)果見表1、表2、表3。4.控制菌檢查方法的驗證：4.1試驗組：取1：10的供試液1
7、0ml,置無菌條件離心(500轉(zhuǎn)/分)3分鐘，取上清液置無菌試管中，用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白豚緩沖液補(bǔ)至原量，混勻后轉(zhuǎn)入100mlPH7.0無菌氯化鈉-蛋白腺緩沖液中，并向其中加入0.lmol/L的硫酸猛溶液10ml,混勻，然后按照中國藥典附錄“微生物限度檢查法”中薄膜過濾法進(jìn)行過濾，沖洗量單膜800ml,并在最后100ml沖洗液中加入相應(yīng)試驗菌液lml,沖洗后取出濾膜，加至100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，置30?35°C培養(yǎng)18?24小時。取培養(yǎng)物0.2ml接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)，于5小時、24小時在366nm紫外線下觀察，同時用未
8、接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。沿
