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1、大鼠脾臟P物質(zhì)免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維的分布及燙傷后含量變化【關(guān)鍵詞】燙傷 【Abstract】AIM:ToinvestigatethedistributionandcontentchangeofsubstanceP(SP)immunoreactivenervefibersintheratspleenpostburnandtoexploretherelationbetmunologicalfunctions.METHODS:ThedistributionofSPimmunoreactivenervefibersmunohistochemicalABCmethodbinedentt
2、echnique.Theratsinedbyradioimmunoassay(RIA).RESULTS:Theratspleenmunoreactivenervefibers.ThetissuecontentofSPinthespleendecreasedsignificantly(P<0.01)at30,60,120and240minutespostburn.CONCLUSION:TheratspleenisrichlyinnervatedbypositiveSPimmunoreactivenervefibersandthecontentofSPinthesplee
3、ndecreasedsignificantlypostburn.SPmayplaytheroleofenhancingimmunologicalfunction. 【Keymunologicalfunction;rat 【摘要】目的：研究P物質(zhì)（substanceP，SP）免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維在大鼠脾臟的分布及燙傷后含量變化，探討SP與免疫功能的關(guān)系.方法：用ABC免疫組織化學(xué)法結(jié)合葡萄糖氧化酶DAB硫酸鎳胺顯色技術(shù)，觀察SP免疫反應(yīng)陽性纖維在大鼠脾臟的分布；在大鼠背部造成占體表面積20%的深Ⅱ度燙傷，燙傷后不同時(shí)間，采用放射免疫分析法測(cè)定大鼠脾內(nèi)SP含量的變化.結(jié)果：
4、在大鼠脾臟內(nèi)有較豐富的SP免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維，多呈串珠狀走行于淋巴組織中；與對(duì)照組比較，大鼠燙傷后脾臟SP含量［(ng・g-1)30min,13.7±4.3vs20.1±3.2,P<0.05；60min,11.8±4.4vs18.2±7.5,P<0.05；120min,7.6±2.2vs17.1±7.5,P<0.01;240min,8.1±2.6vs16.5±6.4,P<0.01］明顯下降.結(jié)論：大鼠脾臟內(nèi)含有較豐富的SP免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維，燙傷后脾內(nèi)SP含量明顯下降，提示SP可能是導(dǎo)致燒傷后機(jī)體免疫功能抑制的因素之一. 【關(guān)鍵詞
5、】P物質(zhì)；脾臟；燙傷；免疫功能；大鼠 0引言 燒傷作為一種強(qiáng)烈的應(yīng)激狀態(tài)可引起神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的變化［1］.P物質(zhì)（substanceP,SP）作為神經(jīng)肽中速激肽類主要成分之一，是一重要的神經(jīng)內(nèi)分泌介質(zhì).胡大海等［2］報(bào)道，大鼠燙傷早期垂體前葉SP神經(jīng)纖維分布范圍及數(shù)目密度有明顯變化.脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，脾內(nèi)是否含有P物質(zhì)，燒傷后其含量變化以及與機(jī)體免疫抑制的關(guān)系如何，我們分別應(yīng)用ABC免疫組織化學(xué)法結(jié)合葡萄糖氧化酶DAB硫酸鎳胺顯色技術(shù)和放射免疫分析法，觀察了SP免疫反應(yīng)陽性纖維在大鼠脾臟的分布以及燙傷后大鼠脾內(nèi)SP含量變化，并對(duì)SP與免疫功能的關(guān)系進(jìn)行了探討.
6、 1材料和方法 1.1材料正常成年雄性SD大鼠90只（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體質(zhì)量200~220g.取10只用于免疫組織化學(xué)形態(tài)學(xué)研究.余80只，隨機(jī)分為8組（n=10)：燙傷大鼠分為30,60,120和240min4組，對(duì)照大鼠對(duì)應(yīng)為30,60,120和240min4組，分別在燙傷和假燙傷30,60,120和240min斷頭處死. 1.2方法 1.2.1免疫組化染色實(shí)驗(yàn)大鼠在乙醚吸入麻醉下，經(jīng)升主動(dòng)脈插管灌流固定.先以生理鹽水快速?zèng)_洗，繼之灌入40g・L-1多聚甲醛約400mL,取出脾臟，置于同一固定液中后固定6h，隨后浸泡于含200g
7、2539;L-1蔗糖的0.1mol・L-1PB液中，4℃過夜.制備30μm厚的恒冷箱切片，行漂浮法ABC結(jié)合葡萄糖氧化酶DAB硫酸鎳胺顯色技術(shù)免疫組織化學(xué)染色. 染色程序：切片先經(jīng)3mL・L-1甲醇雙氧水封閉30min后入10g・L-1TritonX100孵育30min.然后轉(zhuǎn)入兔抗SP抗體（1∶3000，INC公司），4℃孵育24h，再依次進(jìn)入生物素標(biāo)記的豬抗兔IgG抗血清（1∶500，Dako公司）室溫孵育4h，卵白素生物素復(fù)合物（ABC，1∶200，Dako公司）中
