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1、葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝研究：史麗穎，周旭東，石海峰，王永奇【摘要】目的優(yōu)選葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝。方法以總多酚含量為考察指標(biāo)，采用單因素實驗和正交實驗結(jié)合的方法優(yōu)選葫蘆茶根中總多酚的提取工藝，并優(yōu)選D101型大孔樹脂富集葫蘆茶根中總多酚的最優(yōu)條件。結(jié)果優(yōu)化條件結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)實際，確定其最佳提取工藝條件為30℃，50%丙酮，8倍量溶劑提取3次，4.5h/次，此條件下總多酚收率大于6%。以D101型大孔樹脂對總多酚進行富集，最佳工藝條件為2BV/h流速，收集6BV30%乙醇洗脫液，總多酚含量為77.2%，收率為32.3%。結(jié)論該
2、法能有效提取富集葫蘆茶根中總多酚。【關(guān)鍵詞】葫蘆茶;總多酚;提取;富集;正交設(shè)計 葫蘆茶系豆科葫蘆茶屬植物葫蘆茶Tadehagitriquetrum(L.)Ohashi的全草，為民間常用中草藥，主產(chǎn)于廣西、江西、廣東、福建等地[1，2]。本品性涼，味微苦、澀，具有清熱解毒、消積利濕、殺蟲防腐等功效，臨床用于預(yù)防中暑，治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、急性腎炎、黃疸肝炎、腸炎、細菌性痢疾、妊娠嘔吐等[3]。目前對該植物的化學(xué)成分和生物活性的研究已有報道[4~6]，發(fā)現(xiàn)其具有抑菌和殺滅椎實螺的作用。我們在研究中發(fā)現(xiàn)葫蘆茶根中多酚類成分具有較強的殺軟
3、體動物作用，因此我們對其富含的多酚類成分的提取和富集工藝進行了考察，旨在提高總多酚的收率，為其綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。 1儀器與試藥 Unico7200可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司);Laborata4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Heidolph公司);BP210S十萬分之一電子天平(Sartorius公司);V-560紫外可見分光光度計(Jasco公司) 葫蘆茶全草，2006-03采集于廣西壯族自治區(qū)平南縣，經(jīng)遼寧師范大學(xué)陳辰教授鑒定為Tadehagitriquetrum(L.)Ohashi;沒食子酸(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，
4、批號：ZL20090403YG，純度99.68%);D101型大孔吸附樹脂(天津海光化工有限公司);所用試劑均為分析純;實驗用水為蒸餾水?！ ?方法與結(jié)果 2.1總多酚含量測定方法[7~9] 2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品10mg，置于100ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取25ml，置于100ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0.025mg/ml的對照品溶液。分別精確吸取沒食子酸對照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0和2.5ml置于10ml棕色容量瓶中，各加水
5、至5ml，再分別加入Folin試劑1ml，用29%Na2CO3溶液稀釋至刻度，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，30min后，在754nm波長下測定吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程C=3.023A+0.0405(r=0.9995)，其線性范圍為0.0025～0.0125mg/ml?！ ?.1.2樣品溶液的測定準(zhǔn)確稱取30.0g粉碎后葫蘆茶根，置于500ml的圓底燒瓶中，按實驗設(shè)置的處理條件提取，回收溶劑后冷凍干燥，準(zhǔn)確稱取待測樣品50mg，用水溶解，置于100ml的容量瓶中并定容。搖勻，精密量
6、取10ml置于100ml的棕色容量瓶中定容，搖勻，準(zhǔn)確量取2ml于10ml棕色容量瓶中，按“2.1.1”項下自“各加水至5ml”起，同法測定吸光度，計算總多酚的含量和收率。 2.2葫蘆茶根中總多酚提取工藝優(yōu)選[10，11] 2.2.1因素與水平首先對溶媒濃度、提取溫度、提取時間、料液比和提取次數(shù)進行了單因素實驗，確定了各因素最佳條件分別為：60%丙酮，40℃，6h，1∶8和3次。對各因素進行綜合分析，固定提取次數(shù)3次，對溫度(A)，溶媒濃度(B)，提取時間(C)，料液比(D)進行考察，以總多酚含量為考核指標(biāo)，按4因素3水平進行L9
7、(34)正交實驗。各因素水平安排見表1表1考察因素及水平水平A溫度T/℃B溶媒濃度(%) 2.2.2正交實驗設(shè)計及結(jié)果按L9(34)正交設(shè)計表安排實驗，正交設(shè)計及實驗結(jié)果見表2。由表2分析結(jié)果可知，在葫蘆茶總多酚的提取工藝中，各因素對提取效果的影響程度依次為A>B>C>D，最優(yōu)水平組合為A1B1C1D2，即最佳提取工藝為8倍量50%丙酮，30℃提取3次，4.5h/次?！ ?.2.3驗證實驗精確稱取粉碎后葫蘆茶根30.0g(平行6份)，置于500ml的圓底燒瓶中，加入8倍量50%丙酮，30℃提取4.5h，提取3次?；?/p>
8、收溶劑后冷凍干燥。按“2.1.2”項下操作在754nm波長下測定吸光度。6次測定結(jié)果，總多酚平均含量為27.34%，總多酚平均收率為6.26%。結(jié)果表明確定的工藝條件優(yōu)于正交實驗中的任何一組，且重復(fù)性較好，說明確定的工藝
