加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠血液流變學(xué)及免疫功能的影響論文

加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠血液流變學(xué)及免疫功能的影響論文

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1、加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠血液流變學(xué)及免疫功能的影響論文張奉梅,龔繼勇,龔繼梅,王興武【摘要】目的通過加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯(簡(jiǎn)稱中藥)對(duì)荷瘤小鼠血液流變學(xué)及免疫功能的影響,探討中藥在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制。方法昆明種小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組和中藥組,空白組為健康小鼠,給予生理鹽水灌胃;模型組和中藥組為H22荷瘤小鼠動(dòng)物模型,分別給予中藥(中藥組)和生理鹽水(模型組)灌胃.freell,由山東省腫瘤醫(yī)院制劑中心生產(chǎn),批號(hào):070318。大鼠抗小鼠T細(xì)胞表面標(biāo)記單克隆抗體(抗CD3、抗CD4)購于steroetc公司。1.2儀器LBY-NJ

2、6型旋轉(zhuǎn)式血液粘度計(jì),LBY-NJ2型血小板聚集儀,F(xiàn)-820血液分析儀,BECKMAN流式細(xì)胞分析儀。1.3瘤細(xì)胞株小鼠肝癌H22細(xì)胞株,由山東省腫瘤醫(yī)院基礎(chǔ)研究中心提供。2方法2.1荷瘤小鼠模型建立取小鼠肝癌H22細(xì)胞株制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)后培養(yǎng)傳代兩次,將培養(yǎng)液離心得到腫瘤細(xì)胞。將腫瘤細(xì)胞稀釋成2×107/ml濃度后接種到小鼠腹腔內(nèi),0.2ml/只,瘤株在動(dòng)物體內(nèi)傳代2次后,選擇接種8d腹部明顯膨大的小鼠,抽取腹水,鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù),瘤細(xì)胞數(shù)95%,腹水用無菌PBS液稀釋至2×107/ml,接種于小鼠背部近中線處,共

3、40只,0.2ml/只。2.2分組及給藥腫瘤接種24h后隨機(jī)分為兩組,荷瘤H22小鼠20只(模型組),加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯組20只(中藥組);另外未造模的20只健康小鼠為空白對(duì)照組(空白組)。給予空白組和模型組小鼠每日灌胃生理鹽水0.5ml/只,中藥組給予加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯灌胃0.5ml/只。給藥后分別于10d,20d每組各取10只小鼠,末次給藥前禁食16h,自由飲水,稱重。2.3觀察指標(biāo)眶后靜脈叢取血,肝素抗凝,腹腔注射麻醉,剝?nèi)∧[瘤稱重。測(cè)定各組小鼠全血黏度,包括低切變率和高切變率,測(cè)定血小板最大聚集率;按說明書操作應(yīng)用流式細(xì)胞分析儀測(cè)定

4、T細(xì)胞亞群(CD3+,CD4+)。取脾臟和胸腺稱重,計(jì)算脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)。臟器指數(shù)和抑瘤率計(jì)數(shù)公式:臟器指數(shù)(mg/g)=臟器重量(mg)/體質(zhì)量(g);抑瘤率=(模型組平均瘤重-中藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重×100%。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料用±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,以P0.05為差異有顯著性意義。3結(jié)果3.1中藥對(duì)荷瘤小鼠血液流變學(xué)的影響結(jié)果見表1。表1顯示分組給藥10d和20d后,中藥組全血黏度(高切、低切)和血小板最大聚集率均較模型組降低(P<0.05),20d時(shí)血小板

5、最大聚集率變化更明顯(P<0.01);而模型組較空白組全血黏度和血小板最大聚集率升高(P<0.05);中藥組和空白組各項(xiàng)指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表1各組小鼠血液流變學(xué)的變化(略)3.2中藥對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響結(jié)果見表2。結(jié)果顯示灌胃20d后,中藥組T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+)較模型組升高,差異有顯著性(P<0.05);胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)中藥組較模型組也升高(P<0.05);而中藥組和空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。灌胃10d各項(xiàng)指標(biāo)變化不明顯(P>0.05)。表2各組小鼠免疫功能的變化(略)4討論全血黏度增高往

6、往導(dǎo)致全身和局部微循環(huán)障礙,組織缺氧誘發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移。在惡性腫瘤發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移過程中,脫落于血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞能引起血小板聚集,血小板的聚集可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向血管內(nèi)皮接近,并為穿過血管壁進(jìn)入周圍組織形成轉(zhuǎn)移灶提供條件。全血黏度的高切變率主要反映紅細(xì)胞的變形性,而低切變率則主要反映紅細(xì)胞的聚集性。本研究顯示模型組較空白組全血粘度(高切、低切)及紅細(xì)胞最大聚集率均升高,說明惡性腫瘤普遍存在血液高凝狀態(tài)。研究顯示血管內(nèi)凝血是腫瘤形成的前奏,對(duì)血栓形成通路任何形式的干預(yù),都可有效地抑制腫瘤發(fā)展[4]。本結(jié)果顯示中藥的抑瘤率達(dá)32.6%,中藥組小

7、鼠的全血粘度、血小板最大聚集率均較模型組降低(P<0.05),說明加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯能降低腫瘤小鼠升高的血黏度,具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移及改善血液流變學(xué)作用。機(jī)體的免疫應(yīng)答能力與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的聯(lián)系,免疫系統(tǒng)具有限制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)能力。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)后,只有極少數(shù)能夠逃脫宿主免疫細(xì)胞如NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的殺傷,到達(dá)遠(yuǎn)處組織形成新的轉(zhuǎn)移灶。參與抗腫瘤的免疫細(xì)胞包括T細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。T淋巴細(xì)胞不僅是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞,而且是主要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,其免疫調(diào)節(jié)作用是通過其亞群細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的。T細(xì)胞亞群可以反映整個(gè)機(jī)體免疫功能的狀態(tài),

8、CD3+T細(xì)胞代表成熟淋巴細(xì)胞總數(shù),CD4+T細(xì)胞具有增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫細(xì)胞的功能。CD4+T細(xì)胞往往協(xié)助B細(xì)胞進(jìn)行分化和產(chǎn)生抗體,參與促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[5]。胸腺和胰腺為機(jī)體免疫器官,是免疫細(xì)胞產(chǎn)生的場(chǎng)所,因此其指數(shù)也可反映機(jī)體免

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