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1、RP-HPLC法測定梔子中西紅花苷-1及西紅花總苷含量摘要目的：同時(shí)測定27批梔子藥材中梔子苷和西紅花苷－1的含量。方法采用RP－HPLC法，ShimpackVP－ODS柱，水－甲醇梯度洗脫，檢測波長440nm。結(jié)果和結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可同時(shí)測定梔子中西紅花苷－1和西紅花總苷含量。?關(guān)鍵詞RP－HPLC梔子西紅花苷－1西紅花總苷??中國藥典2005版規(guī)定梔子入藥主要是茜草科植物梔子（GardeniajasmjnoidesEllis.）的果實(shí)，除此之外，各地均以梔子的變種小果梔子（G.jasmino
2、idesEills.var.radicansMakino.）大花梔子(G．jasminoidesEllis.Var.grandiflora6Nakai.)的果實(shí)入藥。梔子主要有效成分為多種環(huán)烯醚萜苷類化合物和西紅花苷類化合物，西紅花苷類化合物，即西紅花酸與不同糖基結(jié)合的一系列酯苷，西紅花苷－1是主要成分。西紅花苷類化合物是公認(rèn)的對心血管系統(tǒng)有明顯作用的化合物，然而，目前的梔子藥材和梔子制劑對西紅花苷類成分未進(jìn)行控制［1］。由于藥材梔子來源于多種植物，其品種不同，質(zhì)量優(yōu)劣差異很大，各種文獻(xiàn)對其各個(gè)變種品質(zhì)評價(jià)不一
3、致，筆者選擇了二十七批梔子，用反相高效液相色譜法（PR－HPLC），以西紅花苷－1對照品為標(biāo)準(zhǔn)對樣品中西紅花苷－1、西紅花總苷含量進(jìn)行測定，為梔子的優(yōu)選提供科學(xué)依據(jù)。?1儀器與試劑?1．1儀器與試劑?ShimadzuLC－10ATvp高效液相色譜儀(LC－10ATvp泵、SPD－lOAvp紫外檢測器、CTO－10Asvp柱溫箱、SCL－10Avp系統(tǒng)控制器、Class－vp色譜工作站)，ShimpackVP－ODS柱(150mm×4．6mm,5μm，日本島津)；BIY21lD電子天平(Sartorius，十萬分
4、之一)；KQ32OO超聲波清洗器(昆山超聲儀器廠)；TU－1810型紫外分光光度計(jì)(普析通用)。西紅花苷－l對照品(自制)，經(jīng)過UV、IR、．1HNMR、13CN．MR、MS鑒定，HPLC測得含量為97％；西紅花苷類化合物A、B、C、D自制，TLC為一個(gè)斑點(diǎn)。甲醇為HPLC級（浙江黃巖三力化工廠）；其余試劑為分析純；水為雙重蒸餾水(自制)。梔子藥材來源見表l，經(jīng)張浩教授鑒定。?1．2溶液的制備?梔子藥材5O℃減壓干燥24h，粉碎，過2O目篩，精密稱取0．1g，置具塞錐形瓶中，精密加入水：甲醇(48：52)30m
5、l，密塞。超聲處理20min，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置l0ml量瓶中，加水：甲醇(48：52)定容，搖勻，即得供試品溶液。離心，冰箱冷藏備用。?6精密稱取西紅花苷－1對照品3．9mg，加流動相（水：甲醇＝48：52）溶解定容至10ml，搖勻，配成390μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。取2．5ml加流動相（水：甲醇＝48：52）稀釋至98μg/ml,作為西紅花苷－1對照品溶液。所有對照品溶液冰箱中冷藏。?1．3色譜條件?本實(shí)驗(yàn)對流動相的組成、流動相的酸度、柱溫、檢測波長等進(jìn)行了考察。確定色譜條件如下：色譜柱：
6、ShimpackVP－ODS柱(150mm×4．[KG-20x]6mm,5μm，日本島津)；流動相：水―甲醇梯度洗脫(48：52至20：80)；洗脫時(shí)間50min；檢測波長為440nm［2］；流速為1ml/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量10μl。以西紅花苷－1為對照品，采用外標(biāo)法峰面積定量。在此條件下，樣品中的被測組分與其他峰均能達(dá)到基線分離，西紅花苷－1的保留時(shí)間為8min左右，化合物A、B、C、D（西紅花苷類）的保留時(shí)間分別為15min、28min、33min、38min左右（圖1）。?1．4方法學(xué)考察?1．
7、4．1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6取西紅花苷－1對照品溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣1、2、4、8、12、16μl，測定西紅花苷－1峰面積，記錄峰面積，測定三次，取平均值，結(jié)果以進(jìn)樣量(μl)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：y=636692．88x-35921．094，R．2=0．99998，結(jié)果表明：西紅花苷－1的進(jìn)樣量在范圍0．098－0．1568μg時(shí)與峰面積呈良好線性關(guān)系，可用外標(biāo)法峰面積定量計(jì)算含量。?1．4．2精密度試驗(yàn)精密吸取同西紅花苷－1對照品溶液，連續(xù)測定6次，每次進(jìn)樣10μl，測得西紅花苷
8、－1峰面積的RSD=1．005%，結(jié)果表明儀器精密度良好。?1．4．3穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，連續(xù)三天進(jìn)樣，每天進(jìn)樣兩針，按上述色譜條件測得西紅花苷－1峰面積的RSD=1．4238%；結(jié)果表明溶液穩(wěn)定性良好。?1．4．4重復(fù)性試驗(yàn)平行制備5份同批供試品溶液，按上述色譜條件測得西紅花苷－1峰面積的RSD=0．4636%。?1．4．5加樣回收試驗(yàn)精密稱取已知含量的供試品定量，西紅
