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1、實驗一植物葉綠素含量的測定（分光光度法）(張憲政，1992)一、原理???根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，α為該物質的吸光系數。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光系數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和。這就是吸光度的
2、加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a和b，兩者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。葉綠素a和葉綠素b的比值反映植物對光能利用效率的大小，比值高則大，則反之。二、材料、儀器設備及試劑??試劑：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、實驗步驟??????稱取剪碎的新鮮樣品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直
3、至無綠色為止。把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內，以95%乙醇為空白，在波長663nm和645nm下測定吸光度。????四、實驗結果按計算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的計算】葉綠素a的含量（mg/g）=（12.71′OD663?–2.59′OD645）V/1000*W葉綠素b的含量（mg/g）=(22.88OD645?–4.67OD663)V/1000*W葉綠素a、b的總含量（mg/g）=(8.04′OD663?+20.29′OD645)V/1000*W按Inskeep公式葉綠素a的含量（mg/g）=（12.63′OD
4、663?–2.52′OD645）V/1000*W葉綠素b的含量（mg/g）=(20.47OD645?–4.73OD663)V/1000*W葉綠素a、b的總含量（mg/g）=(7.90′OD663?+17.95′OD645)V/1000*W注：1、葉綠素a和葉綠素b的比值反映植物對光能利用率【1】比如陽生植物葉綠素a和葉綠素b的比值較大 【2】陰生植物葉綠素a和葉綠素b的比值較小2、丙酮-------熔點:-94℃；沸點:56.48℃；是一種無色透明液體，有特殊的辛辣氣味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有機溶劑.下一步實驗方法比較【1】95%乙醇直接提?。?/p>
5、√）【2】95%乙醇加熱提?。T瑞云，1985）【3】無水酒精和80%丙酮等體積混合提取實驗二、不良環(huán)境對植物細胞膜的傷害（(張憲政，1992)）一、原理13植物組織在受到各種不利的環(huán)境條件（如干旱、低溫、高溫、鹽漬和大氣污染）危害時，細胞膜的結構和功能首先受到傷害，細胞膜透性增大。若將受傷害的組織浸入無離子水中，其外滲液中電解質的含量比正常組織外滲液中含量增加，組織受傷害越嚴重，電解質含量增加越多。用電導儀測定外滲液電導率的變化，可反映出質膜受傷害的程度。在電解質外滲透的同時，細胞內可溶性有機物也隨之滲出，引起外滲液可溶性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和
6、核苷酸對紫外光有吸收，對紫外分光光度計測定受傷害組織外滲液消光值，同樣可反映出質膜受傷害的程度。用電導儀法和紫外法測定結果有很好的一致性。二、方法步驟1、取樣及處理采用電導法(張憲政，1992)：將選取的幼嫩葉片和成熟葉片剪下，包在密封袋內置于冰盒中帶回實驗室。將新鮮的葉樣先用自來水輕輕沖洗葉片，除去表面沾污物，再用去離子水沖洗1~2次，用濾紙輕輕吸干葉片表面水分，稱0.2～0.3g并剪成切段，放入50mL帶塞試管中，加入20mL去離子H2O，浸沒樣品4~5h，各處理浸泡時間和測定溫度一致，在室溫下進行，用DDs?11型電導儀測其電導率，然后沸水浴15min，冷
7、卻至室溫再測一次總電導率值。以相對電導率表示細胞質膜透性大小。2、計算：植物組織浸泡的電導率，特稱外滲電導率，此測定方法稱外滲電導率法。（1）外滲電導率K（us/cm*g)=SQ=測定電導率/稱取質量或K（us/cm*g*ml）=SQ=測定電導率/稱取質量*量取體積（2）相對電解質滲出率.電解質滲出率（%）=L1（浸泡液電導率）/L2（煮沸后電導率）×100電解質滲出率(%)=L1(浸泡液電導率)-本底電導率/[L2（煮沸后電導率）-本底電導率]×100式中：L1：組織殺死前外滲液的電導值；L2組織殺死后外滲液的電導值。注：1、事先測定水的電導率2、用吸水紙吸干
8、探頭的水分實驗三植物體內
