hplc法測(cè)定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量

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1、HPLC法測(cè)定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量作者：靳國印張世敏白雪梅田嘉銘【關(guān)鍵詞】原酸復(fù)方膽通是臨床常用的治療急慢性膽囊炎，膽管炎，膽囊、膽管結(jié)石并感染，膽囊術(shù)后綜合征，膽道綜合性疾患等的中成藥。具有清熱利膽、解痙止痛的作用。由茵陳、膽通、溪黃草、穿心蓮、大黃組成。方中君藥茵陳主含6，7二甲氧基香豆素、綠原酸等成分[1]。本文建立了測(cè)定復(fù)方膽通片中茵陳的綠原酸含量的HPLC法，為評(píng)價(jià)該制劑中茵陳的質(zhì)量指標(biāo)提供依據(jù)。1儀器與試藥HP1100高效液相色譜儀（Aglient公司產(chǎn)品，包括在線脫氣機(jī)，四元泵，柱溫箱，VWD紫外檢測(cè)器，3D化學(xué)工作站）。分析天平1

2、/100000（日本產(chǎn)）。乙腈為色譜純，水為三蒸水；磷酸為分析純。綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物檢定所，批號(hào)：07532000111供含量測(cè)定用）。復(fù)方膽通片（廣東信宜市制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：040102043102040502）。2方法與條件52.1色譜條件HypersilBDSC18色譜柱（4.6mm×250mm,10μm）,檢測(cè)波長327nm,柱溫30℃，進(jìn)樣量20μl,流動(dòng)相乙腈：0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脫，程序見表1。色譜圖見圖1、2、3。表1梯度洗脫情況　　2.2溶液的制備2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取一定量的綠原酸對(duì)照品，用流動(dòng)相乙腈：

3、0.4%的磷酸水溶液=5∶95定容，制備成每毫升中含綠原酸1mg的標(biāo)準(zhǔn)液備用。2.2.2供試品溶液的制備精密稱取1.000g樣品于10ml容量瓶中，用流動(dòng)相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95溶解并稀釋至刻度，超聲提取30min，取出，過0.45μm濾膜，放4℃冰箱備用。2.2.3陰性對(duì)照液的制備按處方中藥味的比例，自配不含茵陳的群藥，按其工藝制成陰性對(duì)照，再按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照液在與綠原酸對(duì)照品相同保留時(shí)間處無色譜峰，故認(rèn)為無干擾。2.3線性關(guān)系考察將綠原酸對(duì)照品溶液用流動(dòng)相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶595稀釋，依次配

4、制成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156mg·ml-1的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液20μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，含量(X)為橫坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為Y=38.389X-28.043，r=0.99992,結(jié)果表明在0.1562～0.500mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,每次20μl，測(cè)定峰面積積分平均值為2500.20,計(jì)算RSD為1.07%。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取待測(cè)樣品溶液,分別于0、1、3、5、8h進(jìn)樣20

5、μl,結(jié)果表明供試品中綠原酸在8h內(nèi)穩(wěn)定,RSD1.08%。2.6重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取一定量的同批樣品5份,按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測(cè)定,測(cè)得平均含量為0.4018mg·g-1,計(jì)算RSD2%(n=5)，結(jié)果表明mg·g-1此法重復(fù)性良好。2.7加樣回收率試驗(yàn)5精密稱取已知含量的同批樣品5份,精確加入綠原酸對(duì)照品,按正文供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測(cè)定,結(jié)果見表2。表2加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果2.8樣品測(cè)定取樣品溶液各20μl,以上述色譜條件,測(cè)定3批樣品,測(cè)其峰面積用回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果見表3。表3樣品含量測(cè)定結(jié)果3

6、討論3.1提取液的選定我們分別用甲醇、乙腈和不同比例的流動(dòng)相提取，結(jié)果表明用初始流動(dòng)相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95提取最完全，故選用此提取液。3.2波長的選擇經(jīng)紫外掃描，在280nm和327nm都有吸收，試驗(yàn)表明在327nm處綠原酸峰面積最大，分離度較好，且與參考文獻(xiàn)報(bào)道[2]一致，故選327nm。3.3色譜柱的選擇我們分別用HypersilBDSC18色譜柱（4.6mm×250mm,10μm）和YWGC18色譜柱（4.6mm×250mm,10μm），結(jié)果顯示用HypersilBDSC18色譜柱（4.6mm×250mm,10μ5m）綠原酸出峰時(shí)

7、間適中，分離度較好，故選用此色譜柱。3.4含量的差別從上述各表可以看出，雖是同一廠家的產(chǎn)品，但不同批號(hào)間含量的差別較大，可能與茵陳的產(chǎn)地、采收時(shí)間有關(guān)。所以，為控制中成藥復(fù)方膽通片的質(zhì)量，應(yīng)建立從原材料采購到工藝生產(chǎn)的一整套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。從以上實(shí)驗(yàn)看出，HPLC法測(cè)定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量，精確度高，重復(fù)性好，在0.1562～0.500mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.可作為復(fù)方膽通片中茵陳質(zhì)量指標(biāo)控制的一個(gè)方法。2007年2月靳國印等：HPLC法測(cè)定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量第1期2007年2月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）第1期【參考文獻(xiàn)】1鄭漢臣，蔡少青

8、.藥用植物學(xué)與生藥學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2003.4222白雪梅，吳建翎，羅強(qiáng),