響應(yīng)面法優(yōu)化廣棗總黃酮的超聲提取工藝研究

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1、響應(yīng)面法優(yōu)化廣棗總黃酮的超聲提取工藝研究摘要:采用響應(yīng)面法超聲提取廣棗[Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetH川]中總黃酮,在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,利用Design-Expert8.0、5.0軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn),研究乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間和超聲溫度對總黃酮提取率的影響。結(jié)果表明,廣棗中總黃酮的最佳超聲提取工藝參數(shù)乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)為62%,超聲提取時(shí)間為55min,液料比為35.00:1(V:m),在此試驗(yàn)條件下廣棗總黃酮平均提取率為3.472%。關(guān)鍵詞:廣棗[Choerospondias

2、axNlaris(Roxb.)BurttetHill];總黃酮;超聲提?。豁憫?yīng)面法中圖分類號:S665.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:0439-8114(2015)09-2210-04廣棗為漆樹科植物南酸棗[Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetHill]的干燥成熟果實(shí),又名五眼果、酸棗、山棗子等,是蒙古族常用藥材[1]。廣棗性味甘、酸,具有行氣活血、養(yǎng)心安神的功能,用于氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不安等病癥的治療。廣棗中的化學(xué)成分包括黃酮、有機(jī)酸、甾醇、香豆素、揮發(fā)油、酚酸類、多糖、氨基酸及多

3、種無機(jī)元素等[2]。廣棗中的總黃酮是其有效成分,具有多種生理活性作用。目前,廣棗中黃酮類化合物的提取方法主要有醇提熱回流法[3-5]、醇提滲漉法[6]及水煮提取法[7]等,且大多采用正交設(shè)計(jì)法研究其提取工藝。本研究在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,使用響應(yīng)面分析法[8,9]優(yōu)化廣棗中總黃酮的提取工藝,旨在為廣棗的進(jìn)一步研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和參考。1材料與方法1.1材料、試劑與儀器廣棗藥材(毫州市中藥飲片廠,批號130426),經(jīng)贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥鑒定教研室程齊來教授鑒定。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(A0103,含量彡98%,北京恒元啟天化工技術(shù)研宄院);無水

4、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純。PELambda35UV/VIS型紫外可見分光光度計(jì)(美國珀金埃爾默公司);FW135型手提中藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);H2002型分析天平(上海精天電子儀器公司);EYELAN-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化器械);EYELAA-1000S型水式真空泵(上海愛明儀器有限公司);202A-2型電熱干燥箱(上海陽光試驗(yàn)儀器有限公司);KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2試驗(yàn)方法1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取11.15mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,用60%乙醇溶液溶解

5、,定容于100mL容量瓶中,搖勻,得到111.5mg八的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分別置于10.0mL容量瓶中。依次分別加入60%乙醇溶液稀釋至5.0mL,加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL,搖勻,靜置5min再加入0.3mL的10%硝酸鋁溶液,迅速搖勻,靜置6min,最后加入4mL4%氫氧化鈉溶液,混勻,用60%乙醇溶液稀釋至刻度,充分搖勻。放置15min后,以不加蘆丁的試劑作空白對照,測定波長為509nm時(shí)的吸光度,得到吸光度(Y)與蘆丁溶液濃度(X)的回歸方程為Y=0.011

6、3X-0.0017,R2=0.9997o1.2.2廣棗總黃酮的超聲提取將廣棗50°C恒溫烘干后粉碎過40目篩,稱取0.5g,加入60%乙醇溶液15mL,浸泡15min后,在70°C下超聲50min,抽濾。待樣品冷卻到室溫后再重復(fù)處理1次。合并濾液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑,濃縮后用60%乙醇溶液定容于50mL容量瓶中備用。1.2.3總黃酮含量的測定吸取ImL濾液于10mL容量瓶中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法測定其吸光度,計(jì)算總黃酮含量和提取率。1.2.4單因素試驗(yàn)①乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)。分析不同乙醇體積分?jǐn)?shù)(40%、50%>60%、70%、80%

7、)對廣棗總黃酮提取率的影響;②液料比。分析不同液料比(10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1,mL:g)對廣棗總黃酮提取率的影響;③超聲時(shí)間。分析不同超聲時(shí)間(20、30、40、50、60、70min)對廣棗總黃酮提取率的影響;④超聲溫度。分析不同超聲溫度(40、45、50、60、70°C)對廣棗總黃酮提取率的影響。1.2.5響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果,選取乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)(A)、超聲時(shí)間(B)、料液比(C)3個(gè)對總黃酮提取率影響較大的因素,對提取工

8、藝條件進(jìn)行響應(yīng)面分析,試驗(yàn)因素及水平見表1。1.2.6驗(yàn)證試驗(yàn)對Box-Behnken中心組合試驗(yàn)優(yōu)化后的廣棗總黃酮提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),重復(fù)3次。2結(jié)果與分析2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果2.1.1乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)對廣棗總黃酮提取率的影響由圖

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