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《hplc法測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線(xiàn)閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、HPLC法測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量【】目的建立HPLC法測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量。方法采用HPLC法。以AgilentZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)為色譜柱;流動(dòng)相:0.02%磷酸溶液:乙腈(80:20);流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):205nm。結(jié)果總皂苷(以人參皂苷Re計(jì))在800-6400ug之間呈良好,線(xiàn)性關(guān)系回歸方程:Y=82476.250X-318.56,r=0.9993(n=5);平均回收率為97.1%,RSD=1.15%(n=6)
2、。結(jié)論本法分離度好,專(zhuān)屬性強(qiáng),準(zhǔn)確度高,可用于測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量。 【關(guān)鍵詞】HPLC法;蜜煉甘草良咽含片;總皂苷;含量 蜜煉甘草良咽含片是以烏梅、羅漢果、青果、金銀花等為主要原料制成的保健食品,而羅漢果中的總皂苷具有清咽潤(rùn)喉的功效,目前《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)紫外分光光度法測(cè)定中總皂苷的含量,試劑氣味刺激,操作復(fù)雜,結(jié)果不夠準(zhǔn)確。本文采用HPLC法測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量,操作簡(jiǎn)單,準(zhǔn)確?! ?儀器與試藥 島津LC-20AT型高效液相色譜儀,島
3、津SPD-20A紫外檢測(cè)器,島津SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器,CTO-10AS色譜工作站。METTLERAE240電子天平,JAC-300超聲波清洗機(jī)。 蜜煉甘草良咽含片(批號(hào)20110906,20111202,20120104)人參皂苷Re對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所),乙腈為色譜純,其他為分析純,水為超純水?! ?方法與結(jié)果 2.1色譜條件色譜柱:AgilentZORBAXSB-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:0.02%磷酸溶液:乙腈(80:20);流速:1.0ml/m
4、in;檢測(cè)波長(zhǎng):205nm;進(jìn)樣量:20ul;柱溫:30℃。理論板數(shù)按人參皂苷Re計(jì)算不低于2000。 2.2溶液的制備精密稱(chēng)取人參皂苷Re對(duì)照品400.03mg,置10ml的量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,制成40mg/ml對(duì)照品貯備液。精密稱(chēng)取供試品(相當(dāng)于人參皂苷Re0.2g),置25ml的量瓶中,加水適量,超聲30分鐘,加水稀釋至刻度,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液5ml,用水飽和正丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⒁浦?0ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45μm
5、微孔濾膜過(guò)濾,即得供試品溶液?! ?.3方法學(xué)考察線(xiàn)性關(guān)系的考察:精密量取人參皂苷Re(40mg/ml)對(duì)照品貯備液0.2,0.4,0.8,1.2,1.6.ml,分別置10ml的量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按上述色譜條件,分別進(jìn)樣20ul,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),得回歸方程:Y=82476.250X-318.56,r=0.9993(n=5)。結(jié)果表明,在800-6400μg范圍內(nèi),人參皂苷Re峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線(xiàn)性關(guān)系?! 【芏葘?shí)驗(yàn):精密量取對(duì)照品貯備溶液1ml,置
6、10ml的量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定其峰面積,結(jié)果RSD分別為0.59%,表明儀器精密度良好?! 》€(wěn)定性實(shí)驗(yàn):取供試品溶液(批號(hào)20120104)別于0,2,4,6及8h,分別進(jìn)樣20μl,測(cè)得供試品中人參皂苷Re峰面積值并計(jì)算。結(jié)果RSD為1.62%(n=5),實(shí)驗(yàn)表明,供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定?! ≈貜?fù)性實(shí)驗(yàn):取同一批供試品溶液5份,依法測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為0.85%,表明本方法重復(fù)性良好。 空白干擾試驗(yàn):按溶液制備方法制備不含羅漢果的陰性對(duì)照溶液,按上述色譜條
7、件測(cè)定,結(jié)果在陰性對(duì)照溶液中,與人參皂苷Re保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)?! 〖訕踊厥章蕦?shí)驗(yàn):精密量取6份已知含量的供試品(批號(hào)20120104)2ml,分別加入人參皂苷Re(4mg/ml)對(duì)照品溶液0.5ml,1.0ml,1.5ml各2份,按上述供試品制備方法和色譜條件,制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀,回收率平均值為97.1%,RSD為1.15%(n=6)。結(jié)果加樣回收良好?! 」┰嚻泛繙y(cè)定:取3批供試品,按供試品溶液制備方法制備供試液,用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液20ul,記錄色
8、譜峰峰面積,以外標(biāo)法計(jì)算,測(cè)定人參皂苷Re的含量。結(jié)果批號(hào)20110906,20111202,201201043批供試品人參皂苷Re含量分別為3.95,4.32,3.80mg/g。 3討論 用HPLC法測(cè)定蜜煉甘草良咽含片中總皂苷的含量,同紫外分光光度法比較,快速,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好?! ”痉ㄔ跇悠诽崛》椒ㄖ性囉眠^(guò)正丁醇,75%乙醇,以及通過(guò)Amberlite-XAD-2大孔樹(shù)脂等幾種方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用正丁醇提取的樣品回收率高?! √崛〈螖?shù)考察:按照溶液制備的測(cè)【