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1、三七皂苷R1對老齡大鼠學習記憶的作用及其機制(南京醫(yī)科大學康達學院江蘇南京210000)【摘要】目的：探究三七皂苷R1對老齡大鼠學習記憶的作用及其機制。方法：20月齡SD雄性大鼠30只，以每組10只隨機分為溶劑對照組、三七皂苷R1低劑量(5mg?kg-l)組和高劑量(10mg?kg-l)組，另取2月齡SD雄性大鼠10只為正常對照組?采用Morris水迷宮實驗記錄老齡鼠的行為變化。Westernbolt法測量PKA、P-CREB、BDNF含量。結果：三七皂苷R1能縮短老齡大鼠的逃避潛伏期并增加其穿越平臺次數(shù)，使老齡大鼠腦
2、組織中的BDNF的蛋白表達水平增高。結論：三七皂苷R1能改善老齡大鼠的學習記憶能力。BDNF信號通路是其作用機制之一?！娟P鍵詞】三七皂苷R1;老齡大鼠；Morris水迷宮;學習記憶;BDNF【中圖分類號】R965【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2016)28-0381-02研究表明，衰老會導致人認知功能衰退和腦退行性疾病的發(fā)生［1］,學習記憶能力減退是早期表現(xiàn)之一［2］。三七皂苷R1是三七根莖中的一種活性成分［3］,其對人體的血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、祌經系統(tǒng)和代謝系統(tǒng)具有一定的保護作用［4］。因此，木實驗
3、將研究三期皂苷R1對老年大鼠的學習記憶能力的作用。1.材料與方法1.1實驗動物SPF級20月齡雄性SD大鼠，體重400?500g;2月齡雄性SD大鼠，體重180?200g。均由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供，生產許可證：SCSK(蘇)20020031。1.2藥品與試劑0.9%氯化鈉注射液，辰欣藥業(yè)股份有限公司，產品批號：1404242143;三七皂苷R1,成都貝斯特世紀有限公司，產品批號:BRS011903；BDNF抗體，Sigma公司，產品批號:SAB4300702。1.3實驗動物分組30只20月齡雄性SD大駁，每組1
4、0只隨機分為溶劑對照（Vehicle）組、三七皂苻R1低劑量（5mg?kg-l）組和高劑量（10mg?kg-l）組，另隨機選取10只2月齡雄性SD大鼠為正常對照（Control）組。連續(xù)腹腔注射給藥10天后進行Morris水迷宮實驗。1.4Morris水迷宮法檢測大鼠學憶能力Morris水迷宮實驗是最常用于驗證嚙齒類動物神經認知疾病模型的和評估神經認知治療可行性的實驗，是最常用于評價動物的學習與記憶能力的實驗。Morris水迷宮主要由一個不銹鋼圓形水池和一個可移動的平臺組成。水池直徑120cm,高70cm,水深50cm
5、，水溫25±2°C。水中加入墨汁，使其呈非透明狀。平臺（直徑12cm、高45cm）隱藏于水下2cm處［7］。水池上空通過一攝像機與計算機相連，記錄大鼠的運動軌跡。水池分為4個象限，平臺置于第I象限。大鼠按II?IV象限順序入水，記錄60s內從入水點到爬上平臺所需的時間,即逃避潛伏期（Escapelatencytime｝。若人鼠在60s內找到平臺，則使其在平臺上停留15s。若大鼠在60s內未找到平臺，則引導大鼠找到平臺，并使其在平臺上停留15s，逃避潛伏期記為60s。三個象限潛伏期的平均值記為當天的平均平臺
6、潛伏期［8】。以此方式訓練大鼠4d，每天2次，訓練時間固定在每天9點和15點。第5天進行空間探索實驗，大鼠按II?IV象限順序入水，記錄60s內大鼠穿過原平臺位置的次數(shù)。1.5WesternboltMorris水迷宮實驗結束后，在大鼠安靜狀態(tài)下斷頭處死，迅速取出腦組織（紋狀體、海馬、前額葉皮層、伏隔核），用濾紙吸干水分稱重，按體重體積比加預冷的生理鹽水制備成10%的組織勻漿，5000rpm/min,4°C離心20min,取勻漿上清液。用BCA法組織樣品蛋白定量，加入蛋白上樣緩沖液調至同一濃度，95°C水浴蛋白變性。上樣
7、（20ug/孔），8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉膜1.5h,5%脫脂奶37°C封閉2h，加入BDNF（1:1000）—抗,4°C孵育過夜；TBST洗膜3次,加入辣根過氧化物酶標記的二抗（1:5000），室溫孵育lh,TBST洗膜3次，ECL化學發(fā)光顯影成像。ImageJ圖像軟件對各條帶進行蛋白灰度分析。1.6統(tǒng)計學處理方法運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理分析實驗數(shù)據，并以mean±s表示，采用方差分析和t檢驗進行組間差異分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。1.實驗結果2.1三七皂苷R1對老齡大鼠學習能力的影響
8、在Moms水迷宮實驗中，隨著訓練吋間的延長，所奮組大鼠的平臺潛伏期都逐漸縮短。與正常對照組相比，溶劑對照組大鼠的平臺潛伏期明顯增加（P<0.01,見圖A）。與溶劑對照組相比，三七皂苷R1低劑量組大鼠的平臺潛伏期無明顯差異（P>0.05,見圖A）,而三七皂苷R1高劑量組大鼠的平臺潛伏期明顯縮短（P<0.05,見圖A）。2.2三七皂苷
