三七皂苷r1對(duì)老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶的作用及其機(jī)制

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1、三七皂苷R1對(duì)老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶的作用及其機(jī)制(南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院江蘇南京210000)【摘要】目的：探究三七皂苷R1對(duì)老齡大鼠學(xué)習(xí)記憶的作用及其機(jī)制。方法：20月齡SD雄性大鼠30只，以每組10只隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組、三七皂苷R1低劑量(5mg?kg-l)組和高劑量(10mg?kg-l)組，另取2月齡SD雄性大鼠10只為正常對(duì)照組?采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)記錄老齡鼠的行為變化。Westernbolt法測(cè)量PKA、P-CREB、BDNF含量。結(jié)果：三七皂苷R1能縮短老齡大鼠的逃避潛伏期并增加其穿越平臺(tái)次數(shù)，使老齡大鼠腦

2、組織中的BDNF的蛋白表達(dá)水平增高。結(jié)論：三七皂苷R1能改善老齡大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。BDNF信號(hào)通路是其作用機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】三七皂苷R1;老齡大鼠；Morris水迷宮;學(xué)習(xí)記憶;BDNF【中圖分類號(hào)】R965【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2016)28-0381-02研究表明，衰老會(huì)導(dǎo)致人認(rèn)知功能衰退和腦退行性疾病的發(fā)生［1］,學(xué)習(xí)記憶能力減退是早期表現(xiàn)之一［2］。三七皂苷R1是三七根莖中的一種活性成分［3］,其對(duì)人體的血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、祌經(jīng)系統(tǒng)和代謝系統(tǒng)具有一定的保護(hù)作用［4］。因此，木實(shí)驗(yàn)

3、將研究三期皂苷R1對(duì)老年大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的作用。1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)20月齡雄性SD大鼠，體重400?500g;2月齡雄性SD大鼠，體重180?200g。均由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證：SCSK(蘇)20020031。1.2藥品與試劑0.9%氯化鈉注射液，辰欣藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：1404242143;三七皂苷R1,成都貝斯特世紀(jì)有限公司，產(chǎn)品批號(hào):BRS011903；BDNF抗體，Sigma公司，產(chǎn)品批號(hào):SAB4300702。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組30只20月齡雄性SD大駁，每組1

4、0只隨機(jī)分為溶劑對(duì)照（Vehicle）組、三七皂苻R1低劑量（5mg?kg-l）組和高劑量（10mg?kg-l）組，另隨機(jī)選取10只2月齡雄性SD大鼠為正常對(duì)照（Control）組。連續(xù)腹腔注射給藥10天后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。1.4Morris水迷宮法檢測(cè)大鼠學(xué)憶能力Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是最常用于驗(yàn)證嚙齒類動(dòng)物神經(jīng)認(rèn)知疾病模型的和評(píng)估神經(jīng)認(rèn)知治療可行性的實(shí)驗(yàn)，是最常用于評(píng)價(jià)動(dòng)物的學(xué)習(xí)與記憶能力的實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮主要由一個(gè)不銹鋼圓形水池和一個(gè)可移動(dòng)的平臺(tái)組成。水池直徑120cm,高70cm,水深50cm

5、，水溫25±2°C。水中加入墨汁，使其呈非透明狀。平臺(tái)（直徑12cm、高45cm）隱藏于水下2cm處［7］。水池上空通過一攝像機(jī)與計(jì)算機(jī)相連，記錄大鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡。水池分為4個(gè)象限，平臺(tái)置于第I象限。大鼠按II?IV象限順序入水，記錄60s內(nèi)從入水點(diǎn)到爬上平臺(tái)所需的時(shí)間,即逃避潛伏期（Escapelatencytime｝。若人鼠在60s內(nèi)找到平臺(tái)，則使其在平臺(tái)上停留15s。若大鼠在60s內(nèi)未找到平臺(tái)，則引導(dǎo)大鼠找到平臺(tái)，并使其在平臺(tái)上停留15s，逃避潛伏期記為60s。三個(gè)象限潛伏期的平均值記為當(dāng)天的平均平臺(tái)

6、潛伏期［8】。以此方式訓(xùn)練大鼠4d，每天2次，訓(xùn)練時(shí)間固定在每天9點(diǎn)和15點(diǎn)。第5天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，大鼠按II?IV象限順序入水，記錄60s內(nèi)大鼠穿過原平臺(tái)位置的次數(shù)。1.5WesternboltMorris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，在大鼠安靜狀態(tài)下斷頭處死，迅速取出腦組織（紋狀體、海馬、前額葉皮層、伏隔核），用濾紙吸干水分稱重，按體重體積比加預(yù)冷的生理鹽水制備成10%的組織勻漿，5000rpm/min,4°C離心20min,取勻漿上清液。用BCA法組織樣品蛋白定量，加入蛋白上樣緩沖液調(diào)至同一濃度，95°C水浴蛋白變性。上樣

7、（20ug/孔），8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜1.5h,5%脫脂奶37°C封閉2h，加入BDNF（1:1000）—抗,4°C孵育過夜；TBST洗膜3次,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1:5000），室溫孵育lh,TBST洗膜3次，ECL化學(xué)發(fā)光顯影成像。ImageJ圖像軟件對(duì)各條帶進(jìn)行蛋白灰度分析。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并以mean±s表示，采用方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1三七皂苷R1對(duì)老齡大鼠學(xué)習(xí)能力的影響

8、在Moms水迷宮實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練吋間的延長(zhǎng)，所奮組大鼠的平臺(tái)潛伏期都逐漸縮短。與正常對(duì)照組相比，溶劑對(duì)照組大鼠的平臺(tái)潛伏期明顯增加（P<0.01,見圖A）。與溶劑對(duì)照組相比，三七皂苷R1低劑量組大鼠的平臺(tái)潛伏期無明顯差異（P>0.05,見圖A）,而三七皂苷R1高劑量組大鼠的平臺(tái)潛伏期明顯縮短（P<0.05,見圖A）。2.2三七皂苷