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1、超聲波提取甘草黃酮及其抑菌活性研究論文【摘要】的研究甘草中的黃酮提取方法和抗菌活性。方法利用超聲波技術通過正交試驗提取甘草中的黃酮，杯碟法對其進行抗菌活性的研究。結果超聲波最佳的提取條件為功率385ethodsUsingultrasonictechnology,flavonoidsGlycyrrhizabyorthogonalexperiment,andtheirbacteriostaticactivityethod.ResultsTheoptimumextractiveconditionsforflavonoids
2、e8min.Ultrasonictechnologyhadthehighestextractionrate6.23%.ThesubstanceextractedshoeantibioticactivityagainstStaphylococcusaureus,Bacillussubtil,Escherichiacoli,Aspergillusniger,penicillium,theminimuminhibitoryconcentration(MIC)g/ml,andminimumbactericidalconcen
3、trations(MBC)g/mlrespectively.ConclusionUltrasonictechnologyisaneffectivemethodforextractingflavonoidsfromGlycyrrhiza,l，搖勻備用。1.2.2對比實驗煎煮法：稱取甘草粉10g，加水200ml，浸泡30min，煮沸后，文火煎60min，過濾，共煎煮兩次，合并濾液，定容至100ml，搖勻備用。連續(xù)回流提取法：稱取甘草粉10g，加80%乙醇200ml，水浴回流80min，過濾，共提取兩次，合并濾液，定容至1
4、00ml，搖勻備用。表1因素水平表（略）1.2.3標準曲線的制作稱取在105℃下干燥恒重的蘆丁對照品10mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10ml使之成為濃度為1mg/ml的蘆丁標準品溶液，作為儲備液備用。量取上述溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml，分別加水至3ml，加5%的亞硝酸鈉溶液0.5ml，放置6min，加10%的硝酸鋁溶液0.5ml，搖勻，放置6min，后加5%的氫氧化鈉溶液2.5ml，混勻，放置15min后蒸餾水定容10ml，用紫外分光光度計在510nm處測其吸光度，得到回歸方
5、程為：A＝9.9339C－0.00173（R2=0.9975）1.2.4甘草黃酮的抑菌實驗采用杯碟法測定其抑菌作用，取濃度106～107CFU/ml的各種待試菌懸液0.2ml，與相應滅菌培養(yǎng)基15ml混合制成混菌平板，凝固后，在平板上等距離放入4個滅菌牛津杯，每個菌設置3個重復，一個無菌生理鹽水為對照，取0.1ml黃酮提取液加入牛津杯中，細菌37℃、真菌28℃培養(yǎng)18～24h后，移去牛津杯，量取抑菌圈直徑，直徑越大抗菌活性越強。1.2.5最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測定用無菌水將甘草黃酮提取液稀釋
6、，終濃度分別為1，0.5，0.25，0.0625，0.0313，0.0078mg/ml。取2ml提取稀釋液至15ml培養(yǎng)基，混勻后，倒入平板，凝固后加入100μl106～107CFU/ml的菌液，涂布均勻，放至37℃/28℃培養(yǎng)24h后觀察結果。菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度即MIC。培養(yǎng)48h后，菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度為MBC。2結果與分析2.1超聲波提取法條件的優(yōu)化利用L9（34）正交試驗法優(yōu)化甘草黃酮提取條件結果見表2，各因素對試驗結果影響順序為ACDB，即超聲波功率對黃酮提取率的影響效果最
7、為顯著，其次是超聲波時間。最佳提取條件為A3B2C2D1，即在功率為385in條件下甘草提取液黃酮含量最高。以該最佳提取條件進行驗證實驗，甘草黃酮提取率為6.23%，RSD＝0.862%（n＝6），因此該最佳提取條件是可行的。表2正交實驗結果（略）2.2提取方法的比較由表3可知，超聲波提取方法的提取率明顯高于其它兩種方法，且提取時間最短，提取溶劑用量最少。表3不同的提取方法與黃酮含量的關系（略）2.3抑菌圈的確定由表4可以看出甘草黃酮提取液對金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉都有較強的抑菌效果。而且對細菌
8、的抑制效果強于真菌。表4黃酮提取液的抑菌效果（略）2.4最低抑菌濃度和最小殺菌濃度的確定結果見表5。表5甘草黃酮最低抑菌濃度和最小殺菌濃度（略）由表5可知，甘草黃酮對金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉的最低抑菌濃度分別為0.0625，0.0625，0.0313，0.125，0.25mg/ml；最小殺菌濃度為0.25，0.125，0.
