苯酚硫酸法測(cè)定鮮人參中多糖含量論文

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1、苯酚硫酸法測(cè)定鮮人參中多糖含量論文鐘巖潘浦群王艷紅初麗偉【摘要】目的建立了測(cè)定鮮人參中多糖含量的分析方法。方法用苯酚硫酸法,在波長(zhǎng)490nm處測(cè)定吸光度,人參多糖在10~160μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.9987。平均回收率為98.40%,RSD=2.53%。結(jié)果人參多糖的最佳提取條件為:料液比為1∶10,提取溫度為100℃,提取時(shí)間為4h,人參多糖換算因子為1.58.freelethodforthedeterminationofthecontentofpolysaccharidesfromfreshrootofPanaxginseng.Met

2、hodsThemethodofphenolvitriol.Theabsorbencyrate.ResultsThereumextractionconditionofGinsengpolysaccharidesethodissimple,accurateandrepeatable.Key處和一定濃度范圍內(nèi),吸光度與糖濃度呈線性關(guān)系,采用比色法對(duì)鮮人參多糖含量進(jìn)行測(cè)定。1材料與方法1.1材料與儀器鮮人參;無(wú)水乙醇(AR);95%乙醇(AR);硫酸(AR);苯酚(AR);葡萄糖(AR)。植物粉碎機(jī),電子天平,DU-7500紫外分光光度計(jì)(美國(guó)Backman公司),離

3、心機(jī),真空干燥器,恒溫水浴,真空冷凍干燥機(jī)等。1.2鮮人參多糖的提取與精制新鮮的鮮人參,植物粉碎機(jī)粉碎后,稱(chēng)取適量樣品,按浸提比1∶20,在100℃水浴中提取4h,趁熱用布氏漏斗抽濾,濃縮,加3倍體積95%乙醇醇沉,置冰箱24h,離心20min(5000r/min),沉淀用適量95%乙醇洗滌兩遍,真空冷凍干燥,得人參粗多糖。稱(chēng)取一定量人參粗多糖,制成粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的溶液,采用Sevage法除蛋白,量取水浸濃縮液的體積為V(ml),向其加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇,振蕩20min,3000r/min的轉(zhuǎn)速下,離心15min,合并上清液測(cè)其體積,繼續(xù)

4、加相應(yīng)體積的氯仿和正丁醇,并重復(fù)上述操作,直至氯仿層與正丁醇層之間無(wú)白色沉淀。將水浸濃縮液倒入下端扎好的截流分子量為6000~8000的半透膜袋中,將袋的另一端用繩扎好后,懸掛在盛有水的燒杯里,將燒杯放在磁力攪拌器上,開(kāi)動(dòng)攪拌,蒸餾水透析48h,期間每2h更換一次水,經(jīng)常更換清水使透析膜內(nèi)溶液的濃度差加大,并加以攪拌,加快透析速度,除去無(wú)機(jī)鹽、單糖、雙糖等小分子雜質(zhì)。加3倍體積95%乙醇醇沉。沉淀放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi),冷凍干燥48h,獲得白色固體粉末,干燥即得精制人參多糖。1.2.1樣品溶液的制備精密稱(chēng)取適量樣品,分別置具塞三角瓶中,按一定料液比、浸提溫度、浸提

5、時(shí)間,在熱水浴中浸提4h,用布氏漏斗抽濾,濃縮,濃縮后加3倍體積95%乙醇溶液,靜置24h后,離心,沉淀用蒸餾水溶解,定容至250ml,即為待測(cè)樣液。1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1g,置于100ml容量瓶中,溶解并稀釋至刻度,配成10mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液,吸上述貯備液1ml定容至100ml,配成0.1mg/ml的工作液。精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6ml于25ml具塞刻度試管中,加蒸餾水至2.0ml,再各加5%苯酚溶液1.0ml搖勻,迅速加入濃H2SO4溶液5m

6、l,振搖5min,放置10min,置沸水浴中加熱20min,取出冷卻至室溫,于490nm,以試劑空白為參比測(cè)定吸光度。1.2.3換算因子的測(cè)定精密稱(chēng)取干燥至恒重的精致人參多糖5.0mg[6,7],加蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻得人參多糖儲(chǔ)備液;吸取多糖儲(chǔ)備液2.0ml,置于10ml容量瓶中,加水定容;吸取上述溶液2.0ml,按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法測(cè)定吸光度,同時(shí)做空白對(duì)照;由回歸方程求出此人參多糖儲(chǔ)備液中葡萄糖的濃度,并計(jì)算其中葡萄糖含量。按下式計(jì)算換算因子f:f=m/(c×D×V),式中m為人參多糖的質(zhì)量(mg),c為人參多糖儲(chǔ)備液中葡

7、萄糖濃度(mg/L),D為人參多糖的稀釋倍數(shù),V為體積(ml),測(cè)得f=1.58(n=7)。1.2.4回收率的測(cè)定精密稱(chēng)取適量的樣品加入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(10mg/ml),按照上述方法同時(shí)做3個(gè)重復(fù),分別測(cè)其吸光度,根據(jù)葡萄糖的檢出量,計(jì)算其回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。回收率(%)=實(shí)驗(yàn)測(cè)值-樣品所含被測(cè)成分量/加入純品量×100%1.2.5多糖含量的測(cè)定[8,9]精密吸取樣品液0.2ml,于具塞刻度試管中,加蒸餾水至2ml,按照上述步驟操作,同時(shí)做3個(gè)重復(fù),測(cè)得吸光度值,由回歸方程計(jì)算樣品液中葡萄糖濃度(C),按下面公式計(jì)算樣品液中人參多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。多糖含量(%)=C

8、×D×V×f×10-6/

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