苯酚硫酸法測定鮮人參中多糖含量論文

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1、苯酚硫酸法測定鮮人參中多糖含量論文鐘巖潘浦群王艷紅初麗偉【摘要】目的建立了測定鮮人參中多糖含量的分析方法。方法用苯酚硫酸法，在波長490nm處測定吸光度，人參多糖在10～160μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9987。平均回收率為98.40%，RSD=2.53%。結(jié)果人參多糖的最佳提取條件為：料液比為1∶10，提取溫度為100℃，提取時間為4h，人參多糖換算因子為1.58.freelethodforthedeterminationofthecontentofpolysaccharidesfromfreshrootofPanaxginseng.Met

2、hodsThemethodofphenolvitriol.Theabsorbencyrate.ResultsThereumextractionconditionofGinsengpolysaccharidesethodissimple,accurateandrepeatable.Key處和一定濃度范圍內(nèi)，吸光度與糖濃度呈線性關(guān)系，采用比色法對鮮人參多糖含量進行測定。1材料與方法1.1材料與儀器鮮人參；無水乙醇（AR）；95%乙醇（AR）；硫酸（AR）；苯酚（AR）；葡萄糖（AR）。植物粉碎機，電子天平，DU-7500紫外分光光度計（美國Backman公司），離

3、心機，真空干燥器，恒溫水浴，真空冷凍干燥機等。1.2鮮人參多糖的提取與精制新鮮的鮮人參，植物粉碎機粉碎后，稱取適量樣品，按浸提比1∶20，在100℃水浴中提取4h，趁熱用布氏漏斗抽濾，濃縮，加3倍體積95%乙醇醇沉，置冰箱24h，離心20min（5000r/min），沉淀用適量95%乙醇洗滌兩遍，真空冷凍干燥，得人參粗多糖。稱取一定量人參粗多糖，制成粗多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的溶液，采用Sevage法除蛋白，量取水浸濃縮液的體積為V(ml)，向其加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，振蕩20min，3000r/min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，合并上清液測其體積，繼續(xù)

4、加相應(yīng)體積的氯仿和正丁醇，并重復(fù)上述操作，直至氯仿層與正丁醇層之間無白色沉淀。將水浸濃縮液倒入下端扎好的截流分子量為6000～8000的半透膜袋中，將袋的另一端用繩扎好后，懸掛在盛有水的燒杯里，將燒杯放在磁力攪拌器上，開動攪拌，蒸餾水透析48h，期間每2h更換一次水，經(jīng)常更換清水使透析膜內(nèi)溶液的濃度差加大，并加以攪拌，加快透析速度，除去無機鹽、單糖、雙糖等小分子雜質(zhì)。加3倍體積95%乙醇醇沉。沉淀放入真空冷凍干燥機內(nèi)，冷凍干燥48h，獲得白色固體粉末，干燥即得精制人參多糖。1.2.1樣品溶液的制備精密稱取適量樣品，分別置具塞三角瓶中，按一定料液比、浸提溫度、浸提

5、時間，在熱水浴中浸提4h，用布氏漏斗抽濾，濃縮，濃縮后加3倍體積95%乙醇溶液，靜置24h后，離心，沉淀用蒸餾水溶解，定容至250ml，即為待測樣液。1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1g，置于100ml容量瓶中，溶解并稀釋至刻度，配成10mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，吸上述貯備液1ml定容至100ml，配成0.1mg/ml的工作液。精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6ml于25ml具塞刻度試管中，加蒸餾水至2.0ml，再各加5%苯酚溶液1.0ml搖勻，迅速加入濃H2SO4溶液5m

6、l，振搖5min，放置10min，置沸水浴中加熱20min，取出冷卻至室溫，于490nm，以試劑空白為參比測定吸光度。1.2.3換算因子的測定精密稱取干燥至恒重的精致人參多糖5.0mg［6,7］，加蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻得人參多糖儲備液；吸取多糖儲備液2.0ml，置于10ml容量瓶中，加水定容；吸取上述溶液2.0ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法測定吸光度，同時做空白對照；由回歸方程求出此人參多糖儲備液中葡萄糖的濃度，并計算其中葡萄糖含量。按下式計算換算因子f：f=m/(c×D×V)，式中m為人參多糖的質(zhì)量（mg），c為人參多糖儲備液中葡

7、萄糖濃度（mg/L），D為人參多糖的稀釋倍數(shù)，V為體積（ml），測得f=1.58(n=7)。1.2.4回收率的測定精密稱取適量的樣品加入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（10mg/ml），按照上述方法同時做3個重復(fù)，分別測其吸光度，根據(jù)葡萄糖的檢出量，計算其回收率，結(jié)果見表1?；厥章剩?）=實驗測值-樣品所含被測成分量/加入純品量×100%1.2.5多糖含量的測定［8,9］精密吸取樣品液0.2ml，于具塞刻度試管中，加蒸餾水至2ml，按照上述步驟操作，同時做3個重復(fù)，測得吸光度值，由回歸方程計算樣品液中葡萄糖濃度（C），按下面公式計算樣品液中人參多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。多糖含量（%）=C

8、×D×V×f×10-6/