甘草中甘草苷的含量測定方法研究論文

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1、甘草中甘草苷的含量測定方法研究論文.freelin，含量測定結(jié)果高于2005年版《中國藥典》Ⅰ部項(xiàng)下甘草中甘草苷測定方法30%～50%。結(jié)論該方法能夠準(zhǔn)確地測定甘草中甘草苷的含量?！娟P(guān)鍵詞】甘草甘草苷含量測定正交實(shí)驗(yàn)甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch．，脹果甘草GlycyrrhizainflataBat．或光果甘草GlycyrrhizaglabraL．的干燥根及根莖，有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥的功效［1］。甘草苷作為甘草中的主要有效成分之一，2005年版《中國藥典》（簡稱藥典）新增了其HPLC含量測定方法。作者在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)回流法

2、提取甘草苷的提得率明顯高于2005年版藥典中采取的超聲法，因此本研究對甘草苷含量測定前樣品提取方法進(jìn)行了正交優(yōu)選.freelm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.1%醋酸（20∶80）；流速0.8ml·min-1；檢測波長276nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣體積10μl。對照品及樣品分離的色譜圖見圖1。2.2對照品溶液的制備取甘草苷對照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。2.3提取方法的選擇取同一甘草粉末約0.2g（6份），精密稱定，分別置于6個(gè)50ml具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10ml，稱定重量，2份直接超聲30min（2005年版

3、藥典方法），2份浸泡12h后超聲30min，2份水浴回流30min，放冷，補(bǔ)足重量，靜置。取上清液1ml，置5ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測定，含量分別為0.84%，0.84%，0.91%，結(jié)果顯示水浴回流提取效率最高。圖1對照品及甘草樣品的HPLC圖（略）2.4提取溶劑的選擇取同一甘草粉末約0.2g（4份），精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，分別加入甲醇、70%乙醇、0.5%氨水和70%乙醇（含0.5﹪氨）各10ml，稱定重量，80℃水浴回流2h，取出放冷，補(bǔ)足重量，搖勻，靜置。取上清液1ml，置5ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。檢測方法同

4、上。結(jié)果見表1。表1提取溶劑的考察（略）由表1可以看出，0.5%氨水提取效率最高，故選擇氨水作為提取溶劑。2.5正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析［2］根據(jù)初步實(shí)驗(yàn)，本文采用氨水濃度（%）、溶劑體積（倍）、回流時(shí)間（h）及水浴溫度（℃）為考察因素，選用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)(重復(fù)實(shí)驗(yàn)2次)。結(jié)果見表2～4。表2因素水平（略）對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析，可以得出影響甘草苷提取的因素作用主次為BDCA，方差分析顯示因素B有顯著影響。通過綜合分析，優(yōu)化后的最佳條件為A2B3C1D2，即用藥材250倍體積的0.3%氨水，80℃水浴回流0.5h。2.6線性關(guān)系的考察精密量取上述對照品溶液適量，配制成系列濃度的對

5、照品溶液2.58，5.17，12.93，25.85，51.70，72.38，93.06μg·ml-1。按上述色譜條件測定甘草苷峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y=30922326.8637X+29630.7806，r=0.9999。結(jié)果表明，甘草苷在0.0258～0.9306μg線性關(guān)系良好。表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表4方差分析（略）2.7精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對照品溶液(11.76μg·ml-1)10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.15%。2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一甘草粉末樣品（6份），按上述方法提取、測定，甘草苷平均含

6、量1.22%，RSD=1.21%。2.9加樣回收實(shí)驗(yàn)取甘草粉末約0.2g(9份)，精密稱定，按高、中、低量分別加入甘草苷對照品，再加入0.3%氨水50ml，按照優(yōu)化條件提取、制備樣品，然后按甘草苷含量測定方法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表5。表5回收率測定結(jié)果（略）2.10樣品含量測定取不同產(chǎn)地批號(hào)甘草，按照2005年版《中國藥典》方法和本實(shí)驗(yàn)已優(yōu)選出方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，并計(jì)算含量。結(jié)果見表6。表6樣品測定結(jié)果（略）3討論方差分析顯示氨水用量對結(jié)果有顯著性的影響，本實(shí)驗(yàn)另外考察了500倍溶劑體積提取，同批甘草含量測定結(jié)果為1.23%，與250倍提取體積無明顯差異，

7、故最終確定250倍作為最佳溶劑用量。表5的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，2005年版《中國藥典》甘草項(xiàng)下甘草苷含量測定方法得到的結(jié)果均顯著低于本實(shí)驗(yàn)方法得到的結(jié)果，說明2005年版《中國藥典》甘草項(xiàng)下對甘草苷含量測定的提取不完全，建議再版時(shí)考慮改進(jìn)，本實(shí)驗(yàn)為更客觀地評價(jià)甘草藥材的質(zhì)量提供了一種含量測定的參考方法?！?/p>