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《雷公藤甲素對(duì)大鼠左肺切除加野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓模型的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、●四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文曹錄肺動(dòng)脈高壓可由多種因素引起，在兒童最常見于左向右分流先天性心臟病。對(duì)先天性心臟病肺動(dòng)脈高壓的預(yù)防和治療一直是小兒心血管領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。近年研究證明，不同病因的PH具有相似的肺血管重構(gòu)病理學(xué)特征【11。肺血管重構(gòu)主要包括：1)細(xì)胞增殖：平滑肌細(xì)胞(VSMC)／成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)型、增殖和遷移，嚴(yán)重者出現(xiàn)新生內(nèi)膜形成：2)基質(zhì)重構(gòu)：基質(zhì)崩解更新，構(gòu)成改變和沉著增加[2J。目前研究PH最常用的動(dòng)物模型有慢性缺氧、野百合堿(MCT)、單純肺切除和腹主動(dòng)脈與腔靜脈分流動(dòng)物模型，但均不能形成嚴(yán)重PH最具特征性的病理學(xué)改變?nèi)鐓矤畈∽?/p>
2、與新生內(nèi)膜的形成。有研究報(bào)道血流動(dòng)力學(xué)改變加MCT共同作用可以誘導(dǎo)產(chǎn)生有新生內(nèi)膜形成的PH模型，注射MCT后在鎖骨下動(dòng)詠與肺動(dòng)脈吻合后則形成了新生內(nèi)膜，但該模型肺血流量和壓力均與正常狀態(tài)有差斟31。左肺切除加野百合堿注射所誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓模型組能較好地模擬大量左向右分流的肺血流量劇增所至肺血管重構(gòu)的病理生理改變，適宜于運(yùn)用于進(jìn)行肺動(dòng)脈重構(gòu)藥物干預(yù)的研究。雷公藤是傳統(tǒng)中藥材衛(wèi)矛科雷公藤屬木質(zhì)藤本植物，具有抗炎、抗增殖和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移等廣泛的藥理效用，已經(jīng)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、皮膚病、腎臟疾病和腫瘤等50多個(gè)病種，雷公藤提取物中活性最高的是高氧化
3、二萜類化合物——雷公藤甲素(Triptolide)，國外近年有學(xué)者采用雷公藤甲素干預(yù)大鼠肺動(dòng)脈高壓模型取得成功【41，該試驗(yàn)還被用來研究肺提取的mRNA的不同時(shí)間點(diǎn)的變化，可探討其作用機(jī)制拓開了新的思路。本研究旨在建立一種新的PH模型——大鼠左肺切除加野百合堿腹腔注射所致PH動(dòng)物模型，模擬左向右分流型先心病的病理生理，且通過對(duì)照試驗(yàn)，觀察雷公藤甲素在該P(yáng)H模型中的作用，為今后臨床使用雷公藤甲素延緩或治療PH提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。6●四川大學(xué)臨廉醫(yī)學(xué)碩十專業(yè)學(xué)位論文材料和方法一、動(dòng)物分組與材料：1．雄性SD大鼠(350．_400克)60只(由四川大學(xué)華西公共
4、衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為6組：I組(正常對(duì)照組)；II組(空白對(duì)照組)；HIa組(連續(xù)治療組)；mb組(HIa組的安慰劑對(duì)照組)；Wa組(延遲治療組)；IVb組(Wa組的安慰劑對(duì)照組)。每組各lO只動(dòng)物，各組平均體重差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2．主要試劑和儀器：試劑：雷公藤甲素(福建醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供)純度為99．9％(溶劑：2％丙二醇)，野百合堿MCT(購于Sigma公司)，小鼠抗大鼠a一平滑肌肌動(dòng)蛋白(a。actin)單克隆抗體，PCNA小鼠抗大鼠單克隆抗體(武漢博士德)，MMP2和MMP9小鼠抗大鼠多克隆抗體(武漢博士德)，caspase-3兔抗
5、鼠單克隆抗體(瑞士Roche公司)，引物(上海生物工程有限公司)，Trizol(瑞士Roche公司)，RevertAid“FirstStrandcDNASynthesisKit(立陶宛MBI公司)，TaqDNA聚合酶(北京博大)，dNTP(莢國Promega公司)，Marker(北京天為時(shí)代)，SYBRGreenI(瑞士Roche公司)。儀器：HX-200型動(dòng)物呼吸機(jī)(成都泰盟科技有限公司)，PM-8000型嬰兒有刨心電監(jiān)護(hù)儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，Nikon&Spot圖像采集處理系統(tǒng)(美國)，F(xiàn)TC2000實(shí)時(shí)熒光定量基因擴(kuò)增儀(加拿大
6、楓嶺公司)。二、動(dòng)物模型的建立：1．肺切除手術(shù)：大鼠于后肢肌注阿托n晶(22．5．g／kg)后30min腹腔注射10％水合氯醛(0．04ml／kg)，麻醉后用直徑2mm的塑料導(dǎo)管在直視下進(jìn)行氣管插管，用HX200型動(dòng)物呼吸機(jī)維持通氣(潮氣量3ml，吸呼比1：2，呼吸頻率607◆●■朋川大學(xué)臨陜醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論丈次／min)。左側(cè)胸壁備皮后用碘伏消毒，鋪巾后沿左側(cè)第5肋『日J(rèn)隙切開胸壁和胸膜腔，結(jié)扎肺動(dòng)脈、靜脈和支氣管后切除左肺，用少量生理鹽水沖洗殘端，逐層關(guān)閉胸壁，待動(dòng)物對(duì)刺激有反應(yīng)后拔管。所有動(dòng)物術(shù)后吸氧24小時(shí)(2L／rain／籠)，以后則常氧直
7、到處死。(華西婦產(chǎn)兒科實(shí)驗(yàn)室)2．野百合堿注射：MCT的配制及用量參照文獻(xiàn)‘51報(bào)道的方法進(jìn)行。除正常組外各組于肺切除術(shù)后1周于項(xiàng)背部皮下注射MCT60mg／kg，動(dòng)物均自由飲水和攝食。三、藥物干預(yù)：(華西公共衛(wèi)生動(dòng)物飼養(yǎng)中心)I組(正常對(duì)照組)：未行任何處理常規(guī)飼養(yǎng)35天。Ⅱ組(空白對(duì)照組)：行左肺切除加野百合堿不行任何藥物治療。IIIa組(連續(xù)治療組)：大鼠從肺切除術(shù)后第5天到第35天用雷公藤甲素0．25mg／kg腹膜內(nèi)注射，隔天一次；IIlb組(IIIa組的安慰劑對(duì)照組)：大鼠從肺切除術(shù)后第5天到第35天用等量溶劑(2％丙二醇，5ml／kg)16
8、1腹膜內(nèi)注射，隔天一次。Wa組(延遲治療組)：大鼠從肺切除術(shù)后第2l到第35天用雷公藤甲素O．
