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《豬ghrelin基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、ConstructionofSwineGhrelinEukaryoticExpressionVectoranditsExpressionThesissubmittedtoQngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyCaoYue-sheng(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．SunJin—haiQingdao．ChinaJune，201
2、2獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。啾虢髫碼紅帆年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不
3、同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)啾齠鍺確導(dǎo)師簽名：乳毛煬時(shí)間：年月日時(shí)間：年月日青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要豬Ghre1．n基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)摘要培育節(jié)糧瘦肉型轉(zhuǎn)基因豬需要選擇生長(zhǎng)相關(guān)的基因構(gòu)建表達(dá)載體，本研究選取生長(zhǎng)激素釋放肽Ghrelin基因作為目的基因，其Ghrelin屬于生長(zhǎng)激素促釋放激素受體(GHS-R)的內(nèi)源性配體，通過(guò)與其受體結(jié)合，能夠促進(jìn)生長(zhǎng)激素(GH)的釋放，而且Ghrelin在調(diào)節(jié)能量平衡、增強(qiáng)胃功能以及增強(qiáng)免疫力方面都呈現(xiàn)出重要的效應(yīng)。本研究首先從20日齡的長(zhǎng)
4、白豬十二指腸組織中提取總RNA，根據(jù)Genbank(序列號(hào)：DQ355969．1)提供的GhrelincDNA序列，設(shè)計(jì)帶有NheI和HindIII酶切位點(diǎn)的引物，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)，然后將該基因片段重組于無(wú)多酶切位點(diǎn)的T載體上，構(gòu)建pMI)-Ghrelin質(zhì)粒，多次測(cè)序，選取克隆完整的DNA片段，用于構(gòu)建pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒。同時(shí)利用PCR擴(kuò)增技術(shù)、酶切與電泳及基因測(cè)序的方法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。然后，pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞，觀察熒光蛋白的表達(dá)。結(jié)果如下：1．通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得了G
5、hrelin的cDNA序列，并應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建了pEGFP—Ghrelin重組質(zhì)粒，同時(shí)通過(guò)PCR擴(kuò)增和雙酶切均得到大小為357bp左右的目的片段，經(jīng)測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒含有完整的Ghrelin的CDS序列片段．2．重組質(zhì)粒(pEGFP--Ghrelin)轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞，得到表達(dá)綠色熒光蛋白的細(xì)胞，表明真核表達(dá)栽體pEGFP-Ghrelin構(gòu)建成功．關(guān)鍵詞：生長(zhǎng)激素釋放肽；真核表達(dá)載體；綠色熒光蛋白；反轉(zhuǎn)錄PCR青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文ConstructionofSwineGhrefinEukaryoticExpressionVectoranditsE
6、xpressionAbstractInordertonurtureDewvarietiesof[弘tn-savingfoundationandleanswine，thestudyconstructedexpressionvectorofgrowthrelatedgene．ThestudyselectedGhrelingenesaspurposegene．Ghrelinwasfillendogenouslegendofgrowthhormonetopromotehormonerelease．nr01】ghitsreceptor,Ghrelincoulds
7、u-ongstimulatethereleaseoftheGHandpromotetheanimalfeedintake．Ghrelinplayedanimportantroleon刪ateenergybalanceandinenhancingthegas研cfunctionandimmurliry,too．Thes吣dyextractedtotalRNAfromtheduodenaltissueof20daysoldlandrace．AccordingtothegeneticsequenceofGhrelincDNA(theloginnumberof
8、Genbankwas：DQ355969．1)’designedtheprimerwithgen
