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《人脂肪干細(xì)胞基本生物學(xué)特性、表面抗原及成骨、成脂分化潛能研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、安徽醫(yī)科走學(xué)碩士學(xué)住論文人脂肪干細(xì)胞基本生物學(xué)特性、表面抗原及成骨、成脂分化潛能的研究1．前言創(chuàng)傷、腫瘤術(shù)后或先天性缺陷等導(dǎo)致的組織器官缺損，是臨床上常見的、亟待解決的難題，是整形外科醫(yī)師面臨的主要挑戰(zhàn)。目前主要的治療手段——自體組織移植術(shù)，存在著移植物壞死、被吸收、組織量不足及供區(qū)繼發(fā)畸形等缺陷；異體或異種組織移植，面臨著免疫排斥及潛在的疾病傳播等問題；而近幾十年來一度風(fēng)靡的人工合成材料，由于存在組織排異、有悖正常生理功能、影響疾病診斷及可能潛在的毒性甚至致癌作用等問題，臨床應(yīng)用大大受到限制【11。近年來迅猛發(fā)展的組織工程技術(shù)可能為組織
2、器官的修復(fù)與替代帶來光明的前景。組織工程技術(shù)是將細(xì)胞生物學(xué)和材料學(xué)相結(jié)合，在體外或體內(nèi)構(gòu)建組織或器官的一種新興技術(shù)，包括三大要素——種子細(xì)胞、生物材料及體內(nèi)微環(huán)境，其中種子細(xì)胞在這三大要素中起著最為關(guān)鍵的作用。在組織工程學(xué)發(fā)展的過程中，種子細(xì)胞的選擇經(jīng)歷了不同階段。早期多應(yīng)用成熟的組織細(xì)胞作為種子細(xì)胞，構(gòu)建組織工程化組織，這些特定的組織細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中，分化良好并具有特定表型基因表達(dá)。1991年，Vacanfi等12]從小牛肩胛關(guān)節(jié)軟骨中分離出軟骨細(xì)胞，與可降解的生物材料復(fù)合植入裸鼠皮下組織，成功的構(gòu)建出組織工程化軟骨組織。相同原則被
3、成功的用于構(gòu)建其它組織工程化組織，如骨、肌腱等，這些為組織工程理論的可行性奠定了基礎(chǔ)【3l。但由于成熟的組織細(xì)胞在體外大量擴(kuò)增中非常容易老化，導(dǎo)致細(xì)胞特異表型的喪失，難以獲得足夠的數(shù)量滿足組織工程需要的細(xì)胞量，且對(duì)供區(qū)的損失也較重，有悖于組織工程學(xué)的初衷。于是，人們開始尋找具有強(qiáng)大的體外增殖力能力和多系分化潛能的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)生來源，可以將其分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文理論上，胚胎干細(xì)胞是最佳的選擇，但卻受到倫理道德、種族觀念約束和潛在異體排斥等的限制，前景并不樂觀。成體干細(xì)胞(adultste
4、mcells，ASCs)是指那些存在于已分化組織中的未分化細(xì)胞，在自然條件下，大多處于休眠狀態(tài)或傾向于分化為所在組織的細(xì)胞，以利于維持機(jī)體的正常新陳代謝。成體干細(xì)胞具有分布廣、增殖力強(qiáng)、具有多種分化潛能及不存在倫理學(xué)限制等優(yōu)點(diǎn)，為種子細(xì)胞來源提供了新的思路和前景。其中以骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrowsteincells，BMSCs)研究最多、應(yīng)用最廣，但是其取材時(shí)往往給患者造成很大痛苦，且來源有限，獲取效率也非常低(大約每105個(gè)黏附問質(zhì)細(xì)胞中能夠獲得1個(gè)BMSC)，應(yīng)用受到一定限,NL4，51。近年來，隨著研究的不斷深入，脂肪干細(xì)
5、胞(Adipose-derivedstemcells，ADSCsl逐漸被人們發(fā)現(xiàn)并迅速進(jìn)入種子細(xì)胞研究領(lǐng)域。ADSCs可以從患者脂肪抽吸物中分離出來，通常每毫升脂肪抽吸物大約可以分離出2x105個(gè)ADSCs，其取材簡(jiǎn)單、來源豐富、增殖能力強(qiáng)，初步顯示了作為組織工程種子細(xì)胞的巨大優(yōu)勢(shì)【4，6，71。目前，雖然對(duì)ADSCs取得了一定的研究成果，但仍面臨著許多問題有待于進(jìn)一步闡明。例如，脂肪組織中是否真正存在一類干細(xì)胞，其是否是一類純系細(xì)胞，還是由多種前體細(xì)胞組成，其細(xì)胞活性、增殖分化能力如何，是否存在特異性細(xì)胞表面標(biāo)志等等，仍有待探討。本課題
6、通過對(duì)人脂肪干細(xì)胞(humanadipose．derivedstromalcells，hADSCs)的分離、培養(yǎng)和體外誘導(dǎo)，了解其基本生物學(xué)特性、定向分化潛fiB(成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞)和表面抗原表達(dá)情況，從而可以其進(jìn)一步識(shí)別和高度純化，為尋找理想的組織工程種子細(xì)胞來源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2．材料與方法2．1實(shí)驗(yàn)材料2．1．1主要儀器設(shè)備BCL．MCL型流式細(xì)胞儀C02細(xì)胞培養(yǎng)箱美國(guó)BECKMAN．COULTER公司上海醫(yī)用儀器廠安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文DYY．8B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀HettiehUniversal32臺(tái)式離心機(jī)PCR基因擴(kuò)增儀T
7、GL．16H臺(tái)式高速離心機(jī)UV．3000系列紫外分析儀凝膠數(shù)碼成像系統(tǒng)電熱恒溫培養(yǎng)箱超低溫冰箱快速恒溫?cái)?shù)顯水浴箱恒溫振蕩器電泳儀小型水平和垂直電泳槽超凈工作臺(tái)倒置相差顯微鏡上皿電子天平北京六一儀器廠德國(guó)Hettich公司珠海Hema公司上海醫(yī)用儀器廠SANYO公司常州國(guó)華電器有限公司Bio．Rad公司Bio-Rad公司蘇州凈化設(shè)備廠日本OLYMPUS和Nikon公司上海天平儀器廠2．1．2其它器材電子天平、高溫滅菌鍋、烤箱、微孔濾膜濾器(直徑0．221am)、塑料培養(yǎng)皿、染色缸、60瓦燈、吸管、50ml離心管若干，動(dòng)物手術(shù)臺(tái)、手術(shù)器材由安
8、徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2．1．3主要生化試劑和試劑盒硝酸纖維素膜Amersham公司空白對(duì)照試劑IGFl．FITC、IOFl．PEBECKMAN—COULTER公司鼠抗人CD
