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《人脂肪干細(xì)胞基本生物學(xué)特性、表面抗原及成骨、成脂分化潛能研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、安徽醫(yī)科走學(xué)碩士學(xué)住論文人脂肪干細(xì)胞基本生物學(xué)特性、表面抗原及成骨、成脂分化潛能的研究1．前言創(chuàng)傷、腫瘤術(shù)后或先天性缺陷等導(dǎo)致的組織器官缺損，是臨床上常見的、亟待解決的難題，是整形外科醫(yī)師面臨的主要挑戰(zhàn)。目前主要的治療手段——自體組織移植術(shù)，存在著移植物壞死、被吸收、組織量不足及供區(qū)繼發(fā)畸形等缺陷；異體或異種組織移植，面臨著免疫排斥及潛在的疾病傳播等問題；而近幾十年來一度風(fēng)靡的人工合成材料，由于存在組織排異、有悖正常生理功能、影響疾病診斷及可能潛在的毒性甚至致癌作用等問題，臨床應(yīng)用大大受到限制【11。近年來迅猛發(fā)展的組織工程技術(shù)可能為組織
2、器官的修復(fù)與替代帶來光明的前景。組織工程技術(shù)是將細(xì)胞生物學(xué)和材料學(xué)相結(jié)合，在體外或體內(nèi)構(gòu)建組織或器官的一種新興技術(shù)，包括三大要素——種子細(xì)胞、生物材料及體內(nèi)微環(huán)境，其中種子細(xì)胞在這三大要素中起著最為關(guān)鍵的作用。在組織工程學(xué)發(fā)展的過程中，種子細(xì)胞的選擇經(jīng)歷了不同階段。早期多應(yīng)用成熟的組織細(xì)胞作為種子細(xì)胞，構(gòu)建組織工程化組織，這些特定的組織細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中，分化良好并具有特定表型基因表達(dá)。1991年，Vacanfi等12]從小牛肩胛關(guān)節(jié)軟骨中分離出軟骨細(xì)胞，與可降解的生物材料復(fù)合植入裸鼠皮下組織，成功的構(gòu)建出組織工程化軟骨組織。相同原則被
3、成功的用于構(gòu)建其它組織工程化組織，如骨、肌腱等，這些為組織工程理論的可行性奠定了基礎(chǔ)【3l。但由于成熟的組織細(xì)胞在體外大量擴(kuò)增中非常容易老化，導(dǎo)致細(xì)胞特異表型的喪失，難以獲得足夠的數(shù)量滿足組織工程需要的細(xì)胞量，且對供區(qū)的損失也較重，有悖于組織工程學(xué)的初衷。于是，人們開始尋找具有強(qiáng)大的體外增殖力能力和多系分化潛能的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)生來源，可以將其分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文理論上，胚胎干細(xì)胞是最佳的選擇，但卻受到倫理道德、種族觀念約束和潛在異體排斥等的限制，前景并不樂觀。成體干細(xì)胞(adultste
4、mcells，ASCs)是指那些存在于已分化組織中的未分化細(xì)胞，在自然條件下，大多處于休眠狀態(tài)或傾向于分化為所在組織的細(xì)胞，以利于維持機(jī)體的正常新陳代謝。成體干細(xì)胞具有分布廣、增殖力強(qiáng)、具有多種分化潛能及不存在倫理學(xué)限制等優(yōu)點(diǎn)，為種子細(xì)胞來源提供了新的思路和前景。其中以骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrowsteincells，BMSCs)研究最多、應(yīng)用最廣，但是其取材時往往給患者造成很大痛苦，且來源有限，獲取效率也非常低(大約每105個黏附問質(zhì)細(xì)胞中能夠獲得1個BMSC)，應(yīng)用受到一定限,NL4，51。近年來，隨著研究的不斷深入，脂肪干細(xì)
5、胞(Adipose-derivedstemcells，ADSCsl逐漸被人們發(fā)現(xiàn)并迅速進(jìn)入種子細(xì)胞研究領(lǐng)域。ADSCs可以從患者脂肪抽吸物中分離出來，通常每毫升脂肪抽吸物大約可以分離出2x105個ADSCs，其取材簡單、來源豐富、增殖能力強(qiáng)，初步顯示了作為組織工程種子細(xì)胞的巨大優(yōu)勢【4，6，71。目前，雖然對ADSCs取得了一定的研究成果，但仍面臨著許多問題有待于進(jìn)一步闡明。例如，脂肪組織中是否真正存在一類干細(xì)胞，其是否是一類純系細(xì)胞，還是由多種前體細(xì)胞組成，其細(xì)胞活性、增殖分化能力如何，是否存在特異性細(xì)胞表面標(biāo)志等等，仍有待探討。本課題
6、通過對人脂肪干細(xì)胞(humanadipose．derivedstromalcells，hADSCs)的分離、培養(yǎng)和體外誘導(dǎo)，了解其基本生物學(xué)特性、定向分化潛fiB(成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞)和表面抗原表達(dá)情況，從而可以其進(jìn)一步識別和高度純化，為尋找理想的組織工程種子細(xì)胞來源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2．材料與方法2．1實(shí)驗(yàn)材料2．1．1主要儀器設(shè)備BCL．MCL型流式細(xì)胞儀C02細(xì)胞培養(yǎng)箱美國BECKMAN．COULTER公司上海醫(yī)用儀器廠安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文DYY．8B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀HettiehUniversal32臺式離心機(jī)PCR基因擴(kuò)增儀T
7、GL．16H臺式高速離心機(jī)UV．3000系列紫外分析儀凝膠數(shù)碼成像系統(tǒng)電熱恒溫培養(yǎng)箱超低溫冰箱快速恒溫?cái)?shù)顯水浴箱恒溫振蕩器電泳儀小型水平和垂直電泳槽超凈工作臺倒置相差顯微鏡上皿電子天平北京六一儀器廠德國Hettich公司珠海Hema公司上海醫(yī)用儀器廠SANYO公司常州國華電器有限公司Bio．Rad公司Bio-Rad公司蘇州凈化設(shè)備廠日本OLYMPUS和Nikon公司上海天平儀器廠2．1．2其它器材電子天平、高溫滅菌鍋、烤箱、微孔濾膜濾器(直徑0．221am)、塑料培養(yǎng)皿、染色缸、60瓦燈、吸管、50ml離心管若干，動物手術(shù)臺、手術(shù)器材由安
8、徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院試驗(yàn)動物中心提供。2．1．3主要生化試劑和試劑盒硝酸纖維素膜Amersham公司空白對照試劑IGFl．FITC、IOFl．PEBECKMAN—COULTER公司鼠抗人CD
