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《殺松材線蟲(chóng)海洋細(xì)菌的分離、鑒定及其活性物質(zhì)的分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、摘要松材線蟲(chóng)[Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]是危害松屬植物的重要病原物。尋找具有殺線活性的微生物并對(duì)其活性代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究，是開(kāi)發(fā)效果好、毒性低和環(huán)境相容性好的微生物源殺線蟲(chóng)劑的一條重要途徑。為篩選對(duì)松材線蟲(chóng)具有較強(qiáng)殺線活性的海洋細(xì)菌，本文對(duì)采自于青島近海海域的樣品進(jìn)行細(xì)菌分離，得至1J49株細(xì)菌，以松材線蟲(chóng)為靶標(biāo)線蟲(chóng)，采用浸漬法對(duì)這些菌株的培養(yǎng)液進(jìn)行殺線蟲(chóng)活性測(cè)定，從中篩選出5株具有較高殺線活性的海洋細(xì)菌，這5株細(xì)菌的培養(yǎng)上清液對(duì)松材線蟲(chóng)處
2、理24h后校正死亡率均高于80％。結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征測(cè)定以及16SrDNA序列分析結(jié)果，將5個(gè)菌株分別鑒定為海假交替單胞菌(Pseudoalteromonasmarina)、產(chǎn)黑假交替單胞菌(P．n桫ifaciens)、Vibrioatlanticus、蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)和印度芽孢桿菌(B．indicus)。采用單因素法分析菌株H一42、S一16和G一23的最佳培養(yǎng)條件，結(jié)果表明，3個(gè)菌株產(chǎn)殺線活性物質(zhì)的最適起始pH分別為7．0、6．0和8．0，最適培養(yǎng)溫
3、度分別為15℃、200(27FN25oC；3個(gè)菌株的最適接種體菌齡、培養(yǎng)時(shí)問(wèn)和培養(yǎng)基海水濃度分別為19h、3d和100％。對(duì)菌株H一42fHS．16的殺線活性物質(zhì)組分的研究表明，兩株細(xì)菌的培養(yǎng)上清液的揮發(fā)物粗提液具有很強(qiáng)的殺線活性，在24h內(nèi)的殺線活性高達(dá)100％。經(jīng)SPME—GC／MS(solid—phasemicroextraction—gaschromatography／mass)分析和鑒定，殺線活性揮發(fā)物成分主要為dimethyltrisulfide(LC90=O．060mmol／L)，benzal
4、dehyde(LC90=O．309mmol／L)，dimethyldisulfide(LC90=O．162mmol／L)．tert—butylamine(LC90=O．366mmol／L)。對(duì)菌株G一23所產(chǎn)殺線蟲(chóng)活性物質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，其產(chǎn)生的殺線蟲(chóng)物質(zhì)熱穩(wěn)定性較好，既有極性小的物質(zhì)也有水溶性物質(zhì)，在弱堿性(pH8．0)條件下活性較穩(wěn)定。該研究可為海洋微生物活性物質(zhì)的開(kāi)發(fā)利用以及研發(fā)新型微生物源殺線蟲(chóng)劑提供重要的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：海洋細(xì)菌；鑒定；殺線揮發(fā)物；松材線蟲(chóng)；培養(yǎng)條件AbstractfIIII[
5、1l[1lllIlllIUY2589432Pinewoodnematode(PWN)，Bursaphelenchusxylophilus，isanimportantpathogentoconifertrees．Lookingformicrobeswithnematicidalactivityandanalysingtheiractivesubstancesareanimportantwaytodevelopanovelnematicideofmicrobialoriginwiththefeaturesofh
6、ighactivitytoparasiticnematodes，lowtoxicitytomammalsandothernon—targetorganisms，andbetterenvironmentalcompatibility．Inordertoscreenhighnematicidalmarinebacteria，inthisstudy,forty—ninemarinebacterialstrainswereobtainedfromthesamplescollectedfromthesubtidalb
7、edsatQingdaoandwereassayedinvitrofortheirnematicidalactivitiesagainstPWNsusingimmersiontest．FiveofthesestrainsexhibitedhighernematicidalactivitiestothetestednematodesandtherevisedmortalitiesofPWNstreatedwiththeculturesupernatantsofthefivestrainsfor24hwerem
8、orethan80％．Onthebasisofmorphology,biochemical—physiologicalcharactersand16SrDNAsequenceanalysis，thesefivestainswereidentifiedasPseudoalteromonasmarina，Pnigrifaciens，Vibrioatlanticus，Bacillusthuringiensis，B．in
