烏賊墨多糖sip-1干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠卵巢細(xì)胞凋亡與自噬的研究

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1、學(xué)位論文答辯委員會(huì)組成主席：委員：霄盹渡一力觚爭(zhēng)獻(xiàn)壢導(dǎo)師：捌獷妒么∥汐時(shí)閽．洲}．易．口Ic，弋廣東海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名：f匐p丁穆20侈年莎月，日學(xué)位論文版權(quán)使甩授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查

2、閱和借閱。本人授權(quán)廣東海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于1、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密口。(請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”)作者簽名：導(dǎo)師簽名：20t{；年b具f日20f夕年易月』日烏賊墨多糖SIP一1干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠卵巢細(xì)胞凋亡與自噬的研究摘要烏賊墨多糖(Squidinkpolysaccharide,SIP)是從廢棄物烏賊墨囊中分離提取得到的具有諸多生物學(xué)功能的海洋生物活性物質(zhì)。前期研究發(fā)現(xiàn)SIP對(duì)環(huán)磷酰胺(CP)致小鼠腎、肺、肝、睪丸、卵巢損傷具有保護(hù)作用。本

3、文旨在探討烏賊墨多糖分離純化后的組分SIP．1的結(jié)構(gòu)及其干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡與自噬的機(jī)制。本研究經(jīng)酶法提取、乙醇沉淀方法分離提取得到粗多糖，然后經(jīng)過DEAE．52纖維素柱層析和SephacrylS-300HR凝膠滲透色譜進(jìn)行分級(jí)純化，得到三個(gè)糖組成相對(duì)單一組分SIP-1、SIP．2、SIP．3，以SIP．1為研究對(duì)象，對(duì)其純度進(jìn)行測(cè)定。分離純化得到SIP．1經(jīng)紫外掃描顯示260am及280nm處無吸收峰，說明SIP．1不含有核酸、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。通過高效液相色譜分析，結(jié)果顯示只有一個(gè)峰形較對(duì)稱且峰寬較窄的峰，說明組分SIP．1較純。對(duì)SIP．1進(jìn)行初級(jí)結(jié)構(gòu)分析。紅外光譜對(duì)

4、其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，結(jié)果分析顯示SIP．1在波數(shù)3385．96cm‘1處有很強(qiáng)O．H伸縮振動(dòng)和N．H伸縮振動(dòng)，在波數(shù)2931．23cm"1處有C．H伸縮振動(dòng)，1637．74cm以處是氨基N-H變角振動(dòng)，1077cm‘1和1034．2Icm。1是多糖羧基中C．O伸縮振動(dòng)峰。將SIP．1進(jìn)行完全酸水解，利用高效液相色譜法進(jìn)行單糖組成分析，結(jié)果表明SIP．1含有氨基半乳糖(GalN)、阿拉伯糖(Ara)，其摩爾比為1：1。高碘酸氧化、Smith降解分析結(jié)果顯示SIP．1中可能存在1—2、1_3、1—6類型的糖苷鍵。核磁共振1HNMR和13CNMR分析結(jié)果表明，SIP．1中單糖糖苷鍵和構(gòu)型

5、可能為0【．L．Arap存在l_5糖苷鍵，0【．D．GalNp存在l_6糖苷鍵。40只健康的昆明種雌性小白鼠，將其隨機(jī)分為4組：空白組、模型組、樣品對(duì)照組、治療組。15d后，測(cè)定小鼠體重、生殖器官重量及指數(shù)、卵巢組織病理學(xué)變化及血清激素水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CP對(duì)雌性小鼠卵巢具有毒性損傷作用，而SIP．1能緩解CP所致的卵巢生殖損傷作用。與空白組相比，模型組卵巢重量、卵巢指數(shù)、子宮重量及子宮指數(shù)極顯著(尸<0．01)降低，小鼠體重顯著(尸

6、水平(E2)降低。與模型組相比，SIP．1治療組對(duì)CP所致的各項(xiàng)指標(biāo)變化均有明顯的改善作用(P

7、P—Akt表達(dá)水平顯著降低(氏0．05或P<0．01)。與模型組相比，SIP．1顯著改善CP所致卵巢的損傷，卵巢細(xì)胞的凋亡率顯著降低(尸<0．05)，且SIP．1顯著緩解CP所致Bcl．2、P．AKT表達(dá)水平的降低(尸<0．05或P<0．01)及p38磷酸化水平、LC3、Beclinl表達(dá)水平的升高(尸<0．05)。說明SIP．1可能通過調(diào)控與凋亡及自噬相關(guān)的蛋白的表達(dá)水平來緩解CP所致的卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡與自噬。SIP．1是一種具有新穎結(jié)構(gòu)的純化的烏賊墨多糖，能有效緩解CP所致的雌性生殖系