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《shrna沉默cxcr4基因?qū)β殉舶┘毎鹐gfr信號通路分子機制的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：學(xué)號：2010025掣㈣㈣Y2441007泰山壓虧窿碩士學(xué)位論文論文題目：shRNA沉默CXCR4基因?qū)β殉舶┘毎鸈GFR信號通路分子機制的研究作者姓名：王愛霞學(xué)科、專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)位類型：學(xué)術(shù)學(xué)位型研究方向：婦科腫瘤指導(dǎo)教師：靳衛(wèi)國教授入學(xué)時間：2010年09月論文工作起止時間：2011年08～2013年01月目錄中文摘要???????????????????????????????????．1英文摘要??????????????????????????????????．3符號說明??????????
2、????????????????????????．5—1上．——L日Ⅱ青??????????????????????????????????????????????6材料與方法????????????????????????????????．9結(jié)果?????????????????????????????????????????????．2l討論?????????????????????????????????????????????．28結(jié)論??????????????????????????????????
3、???????????．35附圖????????????????·????????????????????????????。．．36本研究的創(chuàng)新點??????????????????????????????．41參考文獻?????????????????????????????????42綜j苤?????????????????????????????????????????????．49致謝?????????????????????????????????????????????．59攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論
4、文???????????????????????。60原創(chuàng)性聲明????????????????????????????????．61shRNA沉默CXCR4基因?qū)β殉舶┘毎鸈GFR信號通路分子機制的研究研究生：王愛霞專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)導(dǎo)師：靳衛(wèi)國教授中文摘要目的本課題組前期研究已經(jīng)證明以趨化因子4為靶向的shRNA能夠明顯抑制卵巢癌SW626細胞CXCR4mRNA及蛋白的表達，抑制細胞增殖、遷移及侵襲能力。因此，本實驗在前期研究基礎(chǔ)上更深一步研究抑制細胞增殖、促進細胞凋亡的分子機制。方法擴增含CXCR4-shRN
5、A質(zhì)粒及空質(zhì)粒載體，利用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞SW626細胞，本實驗分為3組，干擾組(轉(zhuǎn)染CXCR4一shRNA的SW626細胞)、空載體組(轉(zhuǎn)染空載體的SW626細胞)及空白對照組(不給予任何處理的細胞)，轉(zhuǎn)染48小時后，于倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率；利用酶標儀結(jié)合JC一1法檢測腫瘤細胞線粒體膜電位的變化，采用實時定量RT-PCR法檢測ASKlmRNA的表達情況。細胞免疫化學(xué)和／或WesternBlot檢測Caspase一3、EGFR、ERKl／2、P—C—Jun、Akt、TNF—Q、NFr,B
6、p65、Ir．B．Q蛋白的表達水平。結(jié)果1．轉(zhuǎn)染48小時后在倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率：當細胞處于對數(shù)生長期，狀態(tài)良好，細胞匯合度達90％左右，按脂質(zhì)體與質(zhì)粒之比為1：1的比例進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率達到最高，人卵巢癌細胞SW626細胞的轉(zhuǎn)染效率可達80％左右。2．JC一1法檢測轉(zhuǎn)染前后干擾組與空白對照組及空載體組相比，線粒體膜電位普遍降低(P<0．001)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸<0．05)，而空白組與轉(zhuǎn)染空載體組相比∽=0．234)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3．運用RealtimeRT-PCR檢測，干擾組與空載體組及空
7、白對照組相比，ASKlmRNA的表達明顯增多(P<0．001)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。4．采用細胞免疫化學(xué)及Westernblot蛋白印跡法，轉(zhuǎn)染48小時后，干擾組與空載1體組及空白對照組比較，CXCR：4-shRNA干擾組細胞中EGFR蛋白及其下游信號分子ERKI／2、Akt、NFrBp65、TNF．a(chǎn)蛋白的表達較空白組及轉(zhuǎn)染空載體組均明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸<0．05)，干擾組中CaspaSe．3、pC．Jun、Ir．．B．旺蛋白的表達顯著提高(P<0．05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論CXCR4一shRNA
8、促進細胞凋亡的分子機制可能是通過介導(dǎo)EGFR調(diào)控其下游信號因子，進而抑制腫瘤細胞生長。該分子機制的研究為今后卵巢癌的基因治療提供分子生物學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞：趨化因子4；RNA干擾：EGFR；卵巢癌S7rUDIESoNT皿MOLECIⅡ。ARM匱CⅡANISMSoFTHEEGFRSIGNAL衛(wèi)．A1'丑岡剛【yoNSHoRTHAⅡ理礬RNA．INDUCEDCXCR4SⅡJENCD叮GoNov
