蓮藕酵母雙雜交cdna文庫及ppo基因誘餌載體構(gòu)建

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1、分類號：0789學(xué)校代碼：10712UDC：581.1研究生學(xué)號：2013051644密級：公開@*灶農(nóng)林貴祆大學(xué)2015屆全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文蓮藕酵母雙雜交cDNA文庫及基因誘餌載體構(gòu)建類型中藥學(xué)碩士領(lǐng)域、方向藥用植物資源保護(hù)與利用研究生_________王靜___________指導(dǎo)教師郭宏波副教授完成時間________2015年5月中國陜西楊凌研究生學(xué)位論文的獨創(chuàng)性聲明本人聲明：所呈交的全日制碩士專業(yè)學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行的研究工作及取得的研究結(jié)果；論文中的研究數(shù)椐及

2、結(jié)杲的獲得完全符合學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》，如果違反此規(guī)定，一切后果與法律責(zé)任均由本人承擔(dān)。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究結(jié)杲，也不包含其他人和自己本人已獲得西北農(nóng)林科技大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同事對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文的致謝中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時間：年S月日導(dǎo)師指導(dǎo)研究生學(xué)位論文的承諾本人承諾：我的全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生—...瑪_所呈交的碩士

3、學(xué)位論文是在我指導(dǎo)下獨立開展研究工作及取得的研究結(jié)果，屬于我現(xiàn)崗職務(wù)工作的結(jié)杲，并嚴(yán)格按照學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》而獲得的研冗結(jié)果。如果違反學(xué)?！蛾P(guān)于規(guī)范西北農(nóng)林科技大學(xué)研究生學(xué)術(shù)道德的暫行規(guī)定》，我愿接受按學(xué)校有關(guān)規(guī)定的處罰處理并承擔(dān)相應(yīng)導(dǎo)師連帶責(zé)任。關(guān)于研究生學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文的知識產(chǎn)權(quán)歸屬西北農(nóng)林科技大學(xué)。本人同意西北農(nóng)林科技大學(xué)保存或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，允許論文被查閱和借閱；同意西北農(nóng)林科技大學(xué)將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容

4、授權(quán)匯編錄入《中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》進(jìn)行出版，并享受相關(guān)權(quán)益。本人保證，在畢業(yè)離開（或者工作調(diào)離）西北農(nóng)林科技大學(xué)后，發(fā)表或者使用本學(xué)位論文及其相關(guān)的工作成果時，將以西北農(nóng)林科技大學(xué)為第一署名單位，否則，愿意按《中華人民共和國著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定接受處理并承擔(dān)法律責(zé)任。任何收存和保管本論文各種版本的其他單位和個人(包括研咒生本人)未經(jīng)本論文作者的導(dǎo)師同意，不得有對本論文進(jìn)行復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等侵犯著作權(quán)的行為，否則，按違背《中華人民共和國著作權(quán)法》等有關(guān)規(guī)定處理并追究法律責(zé)任。(保

5、密的學(xué)位論文在保密期限內(nèi)，不得以任何方式發(fā)表、借閱、復(fù)印、縮印或掃描復(fù)制手段保存、匯編論文）Classificationcode:Q789Universitycode:10712UDC:581.1Postgraduatenumber:2013051644Confidentialitylevel:PubicThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015CONSTRUCTIONOFYEASTTWO-HYBRIDSYSTEMCDNALIBRARYAND

6、POLYPHENOLOXIDASEGENEBAITVECTORINLOTUSMajor:TraditionalChineseMedicineResearchfield:TheProtectionandUtilizationofMedicinalPlantsResourceNameofPostgraduate:JingWangAdviser:HongBoGuoDateofsubmission:May2015YanglingShanxiChina蓮藕酵母雙雜交cDNA文庫及PPO基因誘餌載體構(gòu)建摘要蓮藕(

7、Nelumbonucifera)，屬蓮科多年生水生草本植物，具有降脂降壓、減緩氧化、防治脂肪肝等藥理作用，是一種藥食同源的食品。近年來國內(nèi)外對蓮藕需求日益增多，但蓮藕在貯藏保鮮和加工過程中存在褐變問題，導(dǎo)致其商品性及營養(yǎng)價值的下降，嚴(yán)重影響了蓮藕的出口創(chuàng)匯及醫(yī)療效果。研究發(fā)現(xiàn)多酚氧化酶（PPO）參與色素的形成過程，是導(dǎo)致蓮藕褐變的關(guān)鍵酶之一，也在蓮藕抵抗病蟲害等過程中發(fā)揮了重要的作用。但是目前對PPO的研究主要集中在理化特性方面，有關(guān)其基因功能和機理機制的研究還很少。因此，本實驗以蓮藕為材料，在前人基

8、礎(chǔ)上對多酚氧化酶基因進(jìn)行進(jìn)一步分子研究，對蓮藕酵母文庫及PPO基因誘餌載體進(jìn)行構(gòu)建，為后續(xù)運用酵母雙雜交技術(shù)揭示蓮藕多酚氧化酶的互作蛋白及順式作用元件奠定基礎(chǔ)，以期可以從根源上解決蓮藕褐變問題并減少由此產(chǎn)生的經(jīng)濟損失，同時為增強植株抗逆性研究打下基礎(chǔ)。通過本研究得到以下結(jié)果：1.采用CTAB-LiCl法提取蓮藕芽尖總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈并以其為模板進(jìn)行PCR擴增、膠回收、連接轉(zhuǎn)化、測序等試驗得到含有酶切位點NdeI和EcoRI的PPO基因。