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《旋毛蟲谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達(dá)及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01212161842密級(jí)公開碩士學(xué)位論文旋毛蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達(dá)及鑒定作者姓名：李靈鴿導(dǎo)師姓名：崔晶教授學(xué)科門類：理學(xué)專業(yè)名稱：細(xì)胞生物學(xué)培養(yǎng)院系：生命科學(xué)學(xué)院完成時(shí)間：2015年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterMolecularCloning,ExpressionandCharacterizationofaglutathioneS-transferaseTsGSTGenefromTrichi
2、nellaspiralisByLinggeLiSupervisor:Prof.JingCuiCellBiologyDepartmentofBioengineeringApril,2015學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的此碩士學(xué)位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)兄進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容外，本論文不含有任何其他個(gè)人或集體己發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本論文的研究作出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中標(biāo)明。聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：曰肌7^1^-]°日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本學(xué)生在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成
3、的論文及相關(guān)的科研作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)都?xì)w屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保存或向國(guó)家有關(guān)部門和機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者-曰期：年月>曰本研究受國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.81271860and814719
4、81)資助。ThisworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina（No.81271860and81471981)摘要旋毛蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的克隆表達(dá)及鑒定碩士研究生李靈鴿導(dǎo)師崔晶教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室（鄭州450052）河南省分子醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)驗(yàn)室（鄭州450052）摘要谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（Glutathione-S-transferase，GST）是一種具有解毒功能的酶，對(duì)各種有害的外源性化合物（如致癌物質(zhì)和誘變劑）與細(xì)胞內(nèi)
5、源性化合物（如脂質(zhì)過(guò)氧化合物）均有分解功能。GST在寄生蟲的抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用，它可以除去大部分的外源性和內(nèi)源性的親電子化合物，有助于寄生蟲在宿主內(nèi)的生存。GST蛋白酶在一些寄生蟲中已被鑒定并有所研究，如犬惡絲蟲、馬來(lái)絲蟲、日本血吸蟲、曼氏血吸蟲、肝片吸蟲及豬帶絳蟲等，但關(guān)于旋毛蟲GST的研究目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用生物信息學(xué)分析了TsGST與其它寄生蟲及模式生物GST的進(jìn)化關(guān)系，應(yīng)用分子克隆基因技術(shù)表達(dá)并純化了一種旋毛蟲谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶TsGST，獲得rTsGST蛋白及其免疫血清。通過(guò)SDS-PAGE和Wes
6、ternblot分析了該重組蛋白的抗原性及免疫原性，RT-PCR、Westernblot及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）鑒定了TsGST基因在旋毛蟲不同發(fā)育蟲期的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)及其在蟲體的定位；觀察了rTsGST免疫小鼠后的抗體應(yīng)答類型及對(duì)宿主的免疫保護(hù)作用、免疫血清對(duì)旋毛蟲侵入腸上皮細(xì)胞（IEC）的影響及免疫血清介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞對(duì)旋毛蟲的殺傷作用（ADCC）。運(yùn)用生物化學(xué)方法分析了rTsGST的酶活性及其最佳反應(yīng)條件。本研究鑒定了rTsGST的性質(zhì)及其功能，為闡明旋毛蟲的侵入、生存及其與宿主小腸上皮細(xì)胞的相互作用和致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
7、I摘要材料與方法1.旋毛蟲蟲種、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞系旋毛蟲（Trichinellaspiralis）由鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲教研室昆明小鼠傳代保種。BALB/c小鼠、4-6周齡，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所用細(xì)胞系為小鼠腸上皮細(xì)胞（intestinalepithelialcells，IEC），是由本教研室分離培養(yǎng)。2.rTsGST的免疫學(xué)分析將rTsGST免疫BALB/c小鼠，獲得rTsGST免疫血清，應(yīng)用旋毛蟲感染小鼠血清及rTsGST通過(guò)ELISA及Westernblot鑒定rTsGST的抗原性。3.TsGST基因的轉(zhuǎn)錄
8、、表達(dá)及定位收集旋毛蟲的感染性幼蟲、成蟲、新生幼蟲及肌幼蟲，提取總RNA進(jìn)行RT-PCR，擴(kuò)增TsGST基因及內(nèi)參基因GAPDH，檢測(cè)TsGST基因的表達(dá)時(shí)相。收集小鼠感染旋毛蟲后3d與7d的成蟲，新生幼蟲及肌幼蟲，制備可溶性抗原進(jìn)行Westernblot，用rTsGST免疫血清對(duì)不同蟲期的可溶性抗原進(jìn)行識(shí)別，檢測(cè)T
