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1、鄭州工程學(xué)院碩士學(xué)位論文利用嗜酸乳桿菌轉(zhuǎn)化亞油酸為共軛亞油酸的研究姓名:魏明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):農(nóng)產(chǎn)品加工與儲(chǔ)藏工程指導(dǎo)教師:曹健2003.3.1摘要共軛亞油酸由于具有重要生理功能,如抗癌、抗氧化、減肥、抗粥狀動(dòng)脈硬化等,在國(guó)際上已引起了廣泛的關(guān)注。與化學(xué)方法相比,利用酶法生產(chǎn)共軛亞油酸具有很多優(yōu)點(diǎn)。我們對(duì)一株嗜酸乳桿菌進(jìn)行了紫外誘變,對(duì)突變株轉(zhuǎn)化亞油酸為共軛亞油酸的條件進(jìn)行了初步研究,對(duì)菌株產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化。/最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件為:最適培養(yǎng)基為脫脂乳培養(yǎng)基,添加1%(w/v)的乳\糖,1%(w/v)的(NH4)2S04,0
2、.1%(v/v)的亞油酸和1%(w/v)NaCl,接種量為l%,培養(yǎng)時(shí)間為36h,培養(yǎng)溫度為37。C,在此條件下,酶活力可達(dá)252.0U/ml?!?/通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)得到亞油酸異構(gòu)酶轉(zhuǎn)化亞油酸為共軛亞油酸的最佳條件為:反應(yīng)溫度35℃,pH4.0,保溫時(shí)間48h,亞油酸與酶液的比例為1000mg:lOOml。在此條件下亞油酸的轉(zhuǎn)化率達(dá)38.1%。在1mmol/L濃度下,Na+、Fe2+、M92+有助于提高共軛亞油酸的產(chǎn)量,而H92+、C02+、Cu2+、Mn”、Fe”不利于共軛亞油酸的合成。用超聲波處理細(xì)胞以后,亞油酸的轉(zhuǎn)化率
3、顯著提高。/粗酶液經(jīng)酸堿沉淀、硫酸銨分段鹽析、透析脫鹽、柱層析等步驟,純化\倍數(shù)為52.0倍,活力回收7.0%。經(jīng)分離膠濃度為12%的SDS.聚丙烯酰胺凝膠電泳后只有一條譜帶,說(shuō)明該酶由一種亞基構(gòu)成,其亞基分子量為40700D左右。本實(shí)驗(yàn)得到的亞油酸異構(gòu)酶最適反應(yīng)pH為4.0左右,最適反應(yīng)溫度為30~40℃;在60℃以下、pH2.0~7.0之間該酶穩(wěn)定。在lmmol/L濃度下,H92+、Cu2+、Mn”、Fe3+能抑制酶的活性,而Fe2十、M92+、Zn2+、Na+能提高酶的活性。該酶的動(dòng)力學(xué)常數(shù)是21.6mmol/L,最大反應(yīng)
4、速度是7.14mmol/L.hL,/關(guān)鍵詞:嗜酸乳桿菌}亞油酸j亞油酸異構(gòu)酶r共軛亞油酸,AbstractConjugatedlinoleicacidhasattractedconsiderableaattentionintheworldbecauseofitspotentialbeneficialeffects,suchas嶷nticarcinogenieeffect,reducingbodyfatcontent,antioxidation,andpreventingatherosclerosis.Producingconju
5、gatedlinoleicacidbyenzymehasmanyadvantagescomparedtochemicalmethod.PreliminarystudiesonproductionofCOnjugatedlinoleicacidwereconductedbyLactobacillusacidophilus.Theoptimumconditionsfortinoleateisomeraseproducingwereasfollows:thepropermediumwasskimmilk,withadditionof1
6、%(w/v)lactose,t%(W/V)(NH4)2S04,0。t%(v/v)iinoleieacidand1%(w/v)NaCl.Theinoculumvolumnwas1%(v/v),thecultivationperiodwas36hrs,andcultivationtemperaturewas37℃.Linoleateisomeraseactivityreached252.0U/mlundersuchcondition。ThereactionconditionoftheenzymeforproducingCO趣ugat
7、edlinoteieacidwasdetermined.Theoptimumconditionswereasfollowd:reactiontemperature35℃,pH4.0,incubationtime48hrs,theproportionofculturemediumtolinoteieacid1000rag:t00mt,About38.1%linoteieacidwastransferredtoconjugatedlinoleicacidundersuchcondition.Theyiledofconjugatedl
8、inoleicacidcouldbeimprovedbyNa+,F(xiàn)e2+andM92+,whileinhibitedbyH92+,C02+,Cu2+,Mn2+andFe3+undertheconcentrationof1mmol/L.Ultrasonictrea