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《bFGF對骨髓間充質干細胞向神經元樣細胞分化的作用及機制》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文bFGF對骨髓間充質干細胞向神經元樣細胞分化的作用及機制姓名:江和碧申請學位級別:碩士專業(yè):兒科學指導教師:李廷玉2003.5.20重慶醫(yī)科大學碩士學位論文中文全稱符號說明英文全稱骨髓間充質干細胞Marrowstromalstemcelis英文縮寫MSCs堿性成纖維生長因子BasicfibroblastgrowthfactorbFGF全反式維甲酸Alltrans—retinoicacid二甲亞砜DimethyIsulfoxide三羥基四甲基茴香醚gutylatedhydroxya
2、nisole流式細胞儀磷酸緩沖液胎牛血清F10WcytometerPhosphatebufferSOlutionFc!talboyilieserum神經特異烯醇化酶NeuronspecifiCenolase神經微絲Neurofilament微管相關蛋白2Microtubuleassociatedprotein2ATRADMSOBHAFCMPBSFBSNSENFMAP2神經特異核蛋白NeuronspecialnuclearproteinNeuN神經膠質纖維酸蛋白Glialfibrillaryacidpro
3、tein五羥色胺受體l。5-Hydroxytryptamine。。GFAP5一HT。。成纖維生長因子受體FibroblastgrowthfactorreceptorFGFR2bFGF對骨髓問充質干細胞向神經元樣細胞分化的作用及機制—————,————一中文摘要目的對于神經系統(tǒng)疾病所致的神經功能障礙理想的治療方~●I-_●-●●__-_-_●__‘-?法就是神經細胞移植,現代研究發(fā)現認為骨髓間充質干細胞(Marrowstromalstemcells,MSCs)是神經細胞移植理想的供體來源。為了探討堿性成纖
4、維生長因子(BasiCfibroblastgrowthfactor,bFGF)對MSCs分化為神經元樣細胞的作用及其機制,本課題利用bFGF與不同生長因子和化學誘導劑組合誘導MSCs向神經元轉化,以期了解bFGF在MSCs轉分化中的作用機制,為MSCs用于神經細胞移植提供重要基礎。/方法選擇以下不同條件,誘導Mscs向神經元轉化:第1(組:不預誘導,接種細胞一天后加2%--甲基亞砜(Dimethylsulfoxide,DMSO)+200umo]/L三羥基四甲基茴香醚(Butylatedhydroxyan
5、isole,BHA)和不含血清的DMEM/F12;第2組:lOng/mlbFGF預誘導一天,再加2%DMSO+200umol/LBHA和不含血重慶醫(yī)科大學碩士學位論文清的DMEM/F12;第3組:0.5umol/L全反式維甲酸(Alltrans—retinoJcacid,ATRA)+10ng/mlbFGF預處理一天,再用加2%DMSO+200urnol/LBHA和不含血清的DMEM/F12;第4組:10ng/mlbFGF預處理一天,再加不含血清的改良的神經細胞培養(yǎng)基(Modifiedneuronalme
6、dium,MNM)處理:觀察分化過程中細胞形態(tài)、數目的變化,免疫細胞化學檢測分化后細胞神經元烯醇化酶(Neuronspecificeno]ase,NSE)、微管相關蛋白2(Microtubuleassociatedprotein2,MAP2)、膠質纖維酸性蛋白(G1ialfibrillaryacidprotein,GFAP)以及N一甲基(酰)一D一、]冬氨酸受體(NN)AR)和五羥色胺受體。(5-Hydroxytryptamine。)的表達情況,并計算轉化率;觀察FGFR的表達及誘導后不同時間點原癌基因
7、c—myc蛋白的表達情況。結果1.經各組條件誘導后,MSCs均能分化為具有典型神經元形態(tài)的細胞,并明顯表達NSE、MAP。、NMDAR和5一HT。但不表達GFAP;2.各組誘導轉化率相比較,第2和3組即經bFGF,ATf}A+bFGF預誘導組明顯高于不預誘導的第l組,第四組的轉化率最高,達95%以上;3.誘導后的神經元樣細胞FGFR一3表達明顯增強,FGFR一1無明顯改變;4.誘導后的神經元樣細胞4小重慶醫(yī)科大學碩士學位論文時開始表達c—myc蛋白,持續(xù)表達至36小時。結論以DMSO和BHA為基礎誘導劑
8、,bFGF預處理可明顯提高MSCs向神經元樣細胞的轉化率達30%之多:首次發(fā)現濃度為10ng/ml的bFGF主要是通過FGFR一3作用于MSCs,基本上不通過FGFR一1:首次發(fā)現在MSCs向神經元樣細胞分化中的過程中,c—myc可能發(fā)揮著促進MSCs轉分化與凋亡雙重作用。、一。。L,,。。一關鍵詞骨髓間充質干細胞;轉分化;FGFR;c—myc;重慶醫(yī)科大學碩士學位論文THEEFFECT0FbFGFONMARROWSTROMALSTEMCE