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《原代大鼠肝細胞的分離和培養(yǎng)_蔣永生》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第31卷第5期中華中醫(yī)藥學刊Vol．31No．52013年5月CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEMay2013原代大鼠肝細胞的分離和培養(yǎng)12111蔣永生，程向東，劉文洪，項海，姚立(1．浙江中醫(yī)藥大學，浙江杭州310053;2．浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江杭州310022)摘要:目的:探討原代大鼠肝細胞分離及培養(yǎng)的簡易方法，建立穩(wěn)定簡便的大鼠原代肝細胞分離培養(yǎng)方法。方法:采用改良原位兩步循環(huán)灌流法及低速離心法分離原代大鼠肝細胞，常規(guī)DMEM:高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)原代大鼠肝細胞，測定1周內生
2、長情況，倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察肝細胞形態(tài)變化。結果:倒置顯微鏡下觀察肝細胞在接種后3h基本完成貼壁，貼壁的細胞呈卵圓形，24h后胞體變大變平，隨后細胞相互靠攏呈島狀或條索狀連接，3d后掃描電鏡下細胞呈現(xiàn)良好形態(tài)。結論:用改良原位兩步循環(huán)灌注法及低速離心法成功分離并培養(yǎng)原代大鼠肝細胞，可操作性強，可在具備基本細胞培養(yǎng)條件的實驗室推廣。關鍵詞:大鼠;原代肝細胞;分離;培養(yǎng)中圖分類號:R－332文獻標志碼:A文章編號:1673－7717(2013)05－1111－02IsolationandCultureofPrimaryRats
3、Hepatocytes12111JIANGYongsheng，CHENGXiangdong，LIUWenhong，XIANGHai，YAOLi(1．ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，Zhejiang，China;2．ZhejiangCancerHospital，Hangzhou310022，Zhejiang，China)Abstract:Objective:Toinvestigateasimpleandfeasiblemethodforprimaryratshepa
4、tocytesisolationandculture，andtoestablishastableandeasymethodsofisolationandcultureofprimaryratshepatocytes．Methods:Hepatocyteswereisolatedbyusingamodifiedtwo－stepin－situ－circulatingperfusionmethodfollowedbylow－speedcentrifugation．ThehepatocyteswereculturedinDulbecc
5、o＇smodifiedEagle＇smediumwithhighlevelofglucose．Theviabilitiesofcellswereevaluatedwithinoneweek．Cellularmorphologicalchangeswereobservedbyusinganinvertedmicroscopeandscanningelectronmicroscope(SEM)．Results:Theelementaryadherencecompletionofthehepaticcellshadbeenposte
6、dinoculationafter3hunderinvertedmicroscope，thecellsofadherenceofferredovate．Thehepatocytesenlargedandflattenedround，attachedtothesurfaceofcollagen－coateddishes24hafterseedingandthenconnectedwithsurroundingcells，formingislandsortrabs．After3days，cellswerewellundertheS
7、EM．Conclusions:Primaryratshepatocytescanbesuccessfullyi-solatedandculturedusingamodifiedtwo－stepin－situ－circulatingperfusionmethod，whichishighlyfeasible．Thismethodisavailabletoperforminlabswithbasiccellcultureconditions．Keywords:rat;hepatocytes;isolation;culture肝臟是人
8、體重要的實質性器官，很多疾病都會累及肝型膠原酶，EGTA，牛血清白蛋白，HEPES，自制鼠尾膠原，［1］臟。體外肝細胞培養(yǎng)可以用于探索疾病的發(fā)病機制，研PVDF中空膜。［2－3］究藥物的毒理性，是體外藥物試驗的“金標準”。肝細主要儀器:CO2恒溫細胞培養(yǎng)箱;臺式高速冷凍離心［
