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《豬流行性腹瀉病毒S基因序列分析及原核表達.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)SequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusThesi：submittedt01heslsSUl3ttedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfOrtheDegreeofMasterofAgronomy，●一一BiYumin(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．YinYan·boQingdao．ChinaJune，20
2、14萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生躲獺帆沁妒年口紅咖關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表
3、、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：畢王：敏導(dǎo)師簽名：尹時間：加t壚年'，6月步日時間：矽LV年J6月6-H萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要豬流行性腹瀉病毒S基因序列分析及原核表達摘要為調(diào)查近期送檢地區(qū)豬腹瀉的發(fā)病原因，本研究設(shè)計了針對豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒，豬輪狀病毒的引物對送檢樣品進行檢測。結(jié)果顯示，高密、龍13、上海地區(qū)的病料中含有豬流行性腹瀉病毒。經(jīng)仔豬感染實驗證實近期仔豬腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒造成的，這為豬流行性腹瀉病毒的流行病學調(diào)查提供了數(shù)據(jù)支持。為分析近期流行的豬流行性腹瀉病毒S蛋白基因的序列，本研究設(shè)計了3對
4、引物對S基因全基因進行擴增、分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)近期流行的毒株同源性很高，國內(nèi)外毒株之間的差異性較小，但與疫苗株差異較大，主要表現(xiàn)在第59．62位、140位增加了Q、G、V、N、N五個氨基酸，第163位到164位缺失了N、I兩個氨基酸，這說明疫苗株變異造成新毒株流行的可能性很小。利用Anthe5．0和SignalP對S蛋白進行分析，發(fā)現(xiàn)信號肽切割位點均在N端第20位氨基酸處，GM、SH兩個病料株有29個潛在糖基化位點，而LK、HG有28個潛在糖基化位點，其中HG病料株糖基化位點出現(xiàn)明顯差異，這為分析PEDV的流行病學調(diào)查提供了理論依據(jù)。為獲取具有免疫原性的PEDVS蛋白片段，并能有效研究其免疫原
5、性，本研究從毒株LK中擴增了S蛋白基因具有免疫原性的四個片段(Sa，Sb，Sc，Sd)，將得到的目的片段導(dǎo)入原核表達載體pGEX．6P．1中，轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)感受態(tài)細胞中進行表達。將表達的蛋白免疫家兔，分析其免疫原性。經(jīng)SDS．PAGE和Westernblot分析鑒定，表達產(chǎn)物的分子質(zhì)量約為Sa：61ku，Sb：46ku，Sc：41ku，Sd：43ku。經(jīng)瓊擴測出免疫后效價約為Sa(1：16)，Sb(1：32)，Sc(1：4)，Sd(1：16)。該研究表明表達的四段蛋白均具有免疫原性。這為后期亞單位疫苗的研制打下了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒：S基因：序列分析：原核表達：抗原表位
6、萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文AbstractSequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusAbstractToinvestigatethepathogenofcausingdiarrheainswinesrecently,thisstudydesignedprimersforPEDV,TGEV,RVfortesting．TheresultsshowedthatsamplescontainedPEDVinOaomi，LongkouandShanghai．Animalinfectionexperim
7、entsconfirmeddiarrheawascausedbyPEDV．ItprovideddatatosupportepidemiologicalinvestigationofPEDVToanalyzethesequenceofPEDVSproteingene，thisstudydesignedthreepairsofprimerstoamplifyandanalyzetheSgene．Theresultsshowe
