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《豬流行性腹瀉病毒S基因序列分析及原核表達(dá).pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)SequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusThesi：submittedt01heslsSUl3ttedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfOrtheDegreeofMasterofAgronomy，●一一BiYumin(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．YinYan·boQingdao．ChinaJune，20
2、14萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生躲獺帆沁妒年口紅咖關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表
3、、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：畢王：敏導(dǎo)師簽名：尹時(shí)間：加t壚年'，6月步日時(shí)間：矽LV年J6月6-H萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要豬流行性腹瀉病毒S基因序列分析及原核表達(dá)摘要為調(diào)查近期送檢地區(qū)豬腹瀉的發(fā)病原因，本研究設(shè)計(jì)了針對豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒，豬輪狀病毒的引物對送檢樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，高密、龍13、上海地區(qū)的病料中含有豬流行性腹瀉病毒。經(jīng)仔豬感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)近期仔豬腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒造成的，這為豬流行性腹瀉病毒的流行病學(xué)調(diào)查提供了數(shù)據(jù)支持。為分析近期流行的豬流行性腹瀉病毒S蛋白基因的序列，本研究設(shè)計(jì)了3對
4、引物對S基因全基因進(jìn)行擴(kuò)增、分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)近期流行的毒株同源性很高，國內(nèi)外毒株之間的差異性較小，但與疫苗株差異較大，主要表現(xiàn)在第59．62位、140位增加了Q、G、V、N、N五個(gè)氨基酸，第163位到164位缺失了N、I兩個(gè)氨基酸，這說明疫苗株變異造成新毒株流行的可能性很小。利用Anthe5．0和SignalP對S蛋白進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)信號肽切割位點(diǎn)均在N端第20位氨基酸處，GM、SH兩個(gè)病料株有29個(gè)潛在糖基化位點(diǎn)，而LK、HG有28個(gè)潛在糖基化位點(diǎn)，其中HG病料株糖基化位點(diǎn)出現(xiàn)明顯差異，這為分析PEDV的流行病學(xué)調(diào)查提供了理論依據(jù)。為獲取具有免疫原性的PEDVS蛋白片段，并能有效研究其免疫原
5、性，本研究從毒株LK中擴(kuò)增了S蛋白基因具有免疫原性的四個(gè)片段(Sa，Sb，Sc，Sd)，將得到的目的片段導(dǎo)入原核表達(dá)載體pGEX．6P．1中，轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。將表達(dá)的蛋白免疫家兔，分析其免疫原性。經(jīng)SDS．PAGE和Westernblot分析鑒定，表達(dá)產(chǎn)物的分子質(zhì)量約為Sa：61ku，Sb：46ku，Sc：41ku，Sd：43ku。經(jīng)瓊擴(kuò)測出免疫后效價(jià)約為Sa(1：16)，Sb(1：32)，Sc(1：4)，Sd(1：16)。該研究表明表達(dá)的四段蛋白均具有免疫原性。這為后期亞單位疫苗的研制打下了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒：S基因：序列分析：原核表達(dá)：抗原表位
6、萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractSequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusAbstractToinvestigatethepathogenofcausingdiarrheainswinesrecently,thisstudydesignedprimersforPEDV,TGEV,RVfortesting．TheresultsshowedthatsamplescontainedPEDVinOaomi，LongkouandShanghai．Animalinfectionexperim
7、entsconfirmeddiarrheawascausedbyPEDV．ItprovideddatatosupportepidemiologicalinvestigationofPEDVToanalyzethesequenceofPEDVSproteingene，thisstudydesignedthreepairsofprimerstoamplifyandanalyzetheSgene．Theresultsshowe
