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《柱后衍生-高效液相色譜-熒光檢測法測定面粉中的過氧化苯甲酰.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第40卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究簡報(bào)第3期2012年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry466～469DOI：10．3724／SP．J．1096．2012．10835柱后衍生一高效液相色譜一熒光檢測法測定面粉中的過氧化苯甲酰馬明肖玲艷盛亞紅黃姣俞雄飛(寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，寧波315012)(通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司寧波分公司，寧波315040)摘要利用過氧化苯甲酰能夠在氯化血紅素的催化下將底物對羥基苯乙酸氧化成具有熒光的二聚體的性質(zhì)，建立了柱后衍生一高效液相色譜一熒光檢測法測定面
2、粉中過氧化苯甲酰的方法。優(yōu)化了色譜分離條件和柱后衍生條件，結(jié)果表明：催化劑氯化血紅素的濃度為8gmol／L，底物對羥基苯乙酸的濃度為80I．tmol／L，衍生化試劑的pH10．5，衍生溫度為35℃時(shí)衍生效率最高。在優(yōu)化條件下，過氧化苯甲酰的線性范圍為O．5～100mg／L；樣品的檢出限為1mg／kg，樣品的加標(biāo)回收率為98．5％～99．5％。本方法與現(xiàn)有的高效液相色譜法相比，檢測面粉中過氧化苯甲酰具有抗干擾能力強(qiáng)，靈敏度高。關(guān)鍵詞柱后衍生；高效液相色譜；熒光檢測法；過氧化苯甲酰引言過氧化苯甲酰(Benzoylperoxide，BPO)是一種
3、重要的有機(jī)過氧化物。由于BPO對小麥面粉具有后熟、增白等作用，長時(shí)間被用作面粉改良劑。然而，過氧化苯甲酰不僅能破壞面粉中的維生素A、E等營養(yǎng)成分，而且還會(huì)產(chǎn)生對人體有害的苯甲酸和苯酚等有害物質(zhì)。2011年2月11Ft，衛(wèi)生部聯(lián)合六部委下發(fā)了《關(guān)于撤銷食品添加劑過氧化苯甲酰、過氧化鈣的公告(2011年第4號(hào))》，要求自2011年5月1Et起，禁止在面粉中添加過氧化苯甲酰。目前，過氧化苯甲酰的檢測方法主要有高效液相色譜法】、毛細(xì)管電泳法、氣相色譜法、間接碘量法[6]、紫外分光光度法及靜態(tài)注射化學(xué)發(fā)光法[91等。高效液相色譜一熒光檢測法測定某些有
4、機(jī)過氧化物的方法已有報(bào)道，一般是采用辣根過氧化酶(HRP)q1或氯化血紅素(Hemin)[12,131作為催化劑，以對羥基苯乙酸為底物測定有機(jī)過氧化物。然而，目前報(bào)道的這此類方法僅限于測定過氧化氫、過氧酸類的有機(jī)過氧化物等水溶性有機(jī)過氧化物，對過氧化苯甲酰的研究未見報(bào)道。本研究以氯化血紅素為催化劑，對羥基苯乙酸為反應(yīng)底物，采用柱后衍生一高效液相色譜一熒光檢測法檢測面粉中過氧化苯甲酰。由于該衍生反應(yīng)具有一定的專屬性，因此本方法與現(xiàn)有的高效液相色譜法相比，檢測面粉中過氧化苯甲酰具有抗干擾能力強(qiáng)，前處理簡單，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與
5、試劑Alliancee2695型高效液相色譜儀，配有2475型熒光檢測器(美國Waters公司)；PINNACLEPCX型柱后衍生器(美國PICKERING公司)；S40K型pH計(jì)(瑞士Mettler公司)；甲醇和乙醇(色譜純，迪馬科技公司)；氯化血紅素(分析純，Sigma公司)；對羥基苯乙酸(98％，Acros公司)；過氧化苯甲酰、85％HPO、氨水(25％)、NHC1、冰乙酸(分析純，國藥集團(tuán))。2．2實(shí)驗(yàn)方法2．2．1衍生試劑的配制2．68gNHC1溶于200mL水，加入30mL氨水，定容至500mL；將2．6mg氯化血紅素和6．6m
6、g對羥基苯乙酸溶于500mL上述緩沖溶液中，即得柱后衍生試劑。2．2．2色譜條件色譜柱為SunFiC。柱(250mmX4．6mmX5um)，流動(dòng)相為含有0．1％乙酸的甲醇一水2011-07-28收稿；201卜09-30接受本文系國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局科研計(jì)劃項(xiàng)目(No．2011IK217)資助E～mail：mare@nbciq．gov．cn第3期馬明等：柱后衍生一高效液相色譜一熒光檢測法測定面粉中的過氧化苯甲酰(85：1v／)體系，流動(dòng)相在使用前用0．45gm濾膜過濾，流速為0．6mL／min，柱溫為2O℃，樣品盤溫度為4℃。2．2．3衍
7、生條件衍生化試劑為含有8gmol／L氯化血紅素和80~mol／L對羥基苯乙酸的NHC1一NH，·H：O緩沖溶液(pH10．5)。流速為0．2mL／min，反應(yīng)管溫度為35℃；熒光檢測器激發(fā)波長315nm，發(fā)射波長400nm。2．2．4樣品處理取1．0g面粉于10mL比色管中，加入2mL乙腈，充分搖勻以沉淀面粉中的蛋白質(zhì)，再用乙醇定容至10mL，充分振蕩混勻，用0．45um濾膜過濾后進(jìn)樣。人Y3結(jié)果與討論3．1衍生反應(yīng)本方法基于的柱后衍生反應(yīng)如下式：一對羥基苯乙酸在Hemin的催化下被過氧化苯甲酰氧化成能夠產(chǎn)生熒光的二聚體2，2L二羥基一聯(lián)苯
8、一5，5，_二乙酸，而過氧化苯甲酰則被還原成苯甲酸。3．2色譜條件的優(yōu)化3．2．1流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)表明，甲醇一水體系作為流動(dòng)相，過氧化苯甲酰的響應(yīng)峰峰形拖尾較為嚴(yán)重，加人少量乙酸
