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1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2014．45(1)：118—122ISSN2095-1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．1．118豬STAT-la基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備李延生1,2，劉誠1，一，張珂·一，李曉寧1一，李曉泉1．一，尹珊1，一，謝琳娟1，一，何曉霞L2，羅揚(yáng)L2，鐘桃珍I'2，羅廷榮2+(1廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院；2亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室：南寧530005)摘要：【目的】通過制備STAT—lo
2、t多克隆抗體，為進(jìn)一步研究STAT．1僅蛋白的功能特性及探索STAT—lot與豬瘟病毒間的相互作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坷肦T—PCR從豬腎PK一15細(xì)胞中克隆出STAT-la基因保守片段，與pET．32a(+)構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化原核宿主菌(Rosetta)，進(jìn)行1PTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)的重組蛋白經(jīng)純化和復(fù)性濃縮后，免疫小鼠制備STAT．10t多克隆抗體?！窘Y(jié)果】s隊(duì)T-Jd基因能與原核表達(dá)載體pET．32a(+)構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET．STAT—lot，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta后的最佳體外誘導(dǎo)條件是IPTG0．5mmol／L、誘導(dǎo)時(shí)間6h，其重組蛋白主要以包涵
3、體的形式表達(dá)。STAT—lot多克隆抗體具有高效特異性，與真核細(xì)胞PK．15細(xì)胞作用后，在PK-15細(xì)胞內(nèi)能檢測到STAT一1d蛋白表達(dá)，可觀察到大部分細(xì)胞胞漿內(nèi)有綠色熒光，但胞核內(nèi)幾乎無熒光，即sTAT一1儀主要定位在正常PK一15細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)?！窘Y(jié)論】制備獲得的豬STAT—lot多克隆抗體特異性好，既能與原核細(xì)胞大腸桿菌(Rosetta)表達(dá)的STAT．10t反應(yīng)，又能與真核細(xì)胞PK．15的STAT—lct發(fā)生反應(yīng)。關(guān)鍵詞：豬；STAT-Ia基因；原核表達(dá)；多克隆抗體中圖分類號(hào)：$858．28文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095—1191(2014)叭一0118—05P
4、rokaryoticpressionof。STATlaandProRaryoticexpresslonolporcine'-1genean上AJ
5、oreparationofpolyclonalantibodyagainstSTAToreoarationolantibo(1yagainst1A1—10【l—10【LIYan—shen91”，LIUChen91”，ZHANGKel”，LIXiao—ning1,2LIXiao-quanl一，YINShanl?，XIELin-juanl一，HEXiao—xial?，LUOYan91”，ZHONGTad—zhenlp．LUOTing—r
6、on92+(1CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity：Nanning530005，China；2StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro-bioresources，Nanning530005，China)Abstract：【Objective]ThepolyelonalantibodySTAT一1儀waspreparedtoprovidereferencesforfurtherresearchonfunctionalcha
7、racteristicsofSTAT一1dandinteractivemechanismbetweenhogcholeravirusandSTAT一1d．【Method】UsingRT—PCR．STAT—J“geneconservativefragmentwasclonedfromPK—15cellinswinekidney，andtogetherwithpET一32a(+)，prokaryoticexpressionrecombinantplasmidwasconstructed．TheSTAT一1dpolyclonalantibodywaspreparedafterI胛G
8、inducibleexpressionofRosetta，andpurificationandconcentrationofinclnsionbodyprotein．IResuh】Prokaryoticex—pressionrecombinantplasmidpET—STAT—lotwasproducedbySTAT—lotgeneandprokaryoticexpressionvectorpET一32a(+)．TheoptimalinductionconditionsfortransformingEc
