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1、廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)2010，41(6)：598-601GuallgxiAgriculturalSciences豬D型產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌毒素分段基因的原核表達(dá)黃百花，劉文娟，李志勇，譚春萍，周松峰，譚穎翌，羅佳，陸芹章+(廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005)摘要：根撤,enBarrk已發(fā)表的產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(T．Plll)f0】A基因序列(A腳78)設(shè)計(jì)1對引物，從豬源D型'PPm中擴(kuò)增出toxA基因片段(3858bp)。再根據(jù)toxA基因序列設(shè)計(jì)3對引物，分別擴(kuò)增出ZQ(1084bp)、ZH(1092bp)、HM(9
2、06bp)3個分段基因，將其克隆至原核表達(dá)載體pET32a，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進(jìn)行融合表達(dá)。經(jīng)SDS—PAGE和West—emblotting檢測分析，發(fā)r-覓ZQ、HM基因的表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在，大小分別為75、50kDa，ZH基因不表達(dá)。動物試驗(yàn)結(jié)果表明，HM重組蛋白具有良好的免疫原性、反應(yīng)原性及一定的生物學(xué)活性，而ZQ重組蛋白沒有免疫原性、反應(yīng)原性及生物學(xué)活性。通過間接ELlSA的方法檢測抗毒素的陽性豬血清，結(jié)果表明，HM重組蛋白較天然蛋白具有更高的特異性。關(guān)鍵詞：豬D型產(chǎn)毒素多殺巴氏桿菌；毒素基因；分段；原核
3、表達(dá)中圖分類號：$858．28文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1002—8161(2010)06-0598--04Prokaryoticexpressionofsub-toxAgenefortoxigenicPasteurellaMultocidatoxinofswineserotypeDHUANGBai-hua，LIUWen-juan，LIZhi-yong，TANChun—ping，ZHOUSong-feng，TANYing—yi，LUOJia，LUQin-zhang’(CoHegeofAnimalScienceandTechno
4、logy，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：Apairofprimersw鷦designedusingtoxAgenesequenceoftoxigenicPasteurellamuhocidaf胛m)(Gen—Bank)，anda3858bpfragmentWaSamplifiedfromtoxigenicPaSteumllamujtocidawithswineserotypeDusingPCR．WiththetemplateoftoxAgenesequence，
5、threepairsofprimersweredesignedwhichamplified1084bp(ZQ)，1092bp(ZH)and906bp(HM)genefragments．neacquiredPCRproductswelt．einsertedintoprokaryoficexpressionpET32a(+)，andtrans-formedintoEc格BL21(DE3)‘∞expressioninducedbyIPTG．TheexpressedrecombinantproteinWaSdetectedusing
6、SDS-PAGEandwesternblotting．ItWaSfoundthattheexpressionproductsofZQandHMexistedasinclusionbodywith75and50kDa．whileZHgavenoexpression．MousetestresultsshowedthatHMrecombinantproteinhadgoodimmuno-logicalreactionandbiologicalactivities，whileZQproteinWasfoundwithoutanyac
7、tivity．neantitoxicpositive8erllnlofswinewagdetectedbyindirectELISAmethod．a(chǎn)ndthespecificityoftherecombinantproteinHMWaft,foundtobehigherthanthatofnegativeprotein．ThisstudyprovidesusefuldataforfurtheruseofthePasteurellamtIJtocidatoxin(PMT)．Keywords：toxigenicPasteurel
8、lamultocidaofswineserotypeD：sub-toxAgene；fragment；prokaryoticexpression．產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(ToxingenicPasteurellamuhocida，m1)是引起豬進(jìn)行性萎縮性鼻炎(Pro．gressiveatro
